Desenvolvimento de marcador molecular para o diagnóstico de variedades de leishmania circulantes na Região Norte do Brasil. - Sibajev, Alexander (Universidade Federal do Amazonas, 2015)
A determinação da espécie responsável pela Leishmaniose Tegumentar Americana e a detecção específica das variedades do protozoário agente dessa doença endêmica na Amazônia, é importante para determinação do comportamento clínico e indicação da conduta terapêutica, devido as diversas respostas aos quimioterápicos pelas espécies de Leishmania. No momento se desconhece um teste disponível para a Leishmania (Viannia) guyanensis, que seja capaz também de incluir suas variedades intra-específicas obtidas de casos humanos e de hospedeiros e vetores silvestres. Neste trabalho se conseguiu discriminar alguns isolados de Leishmania (Viannia) guyanensis, de Leishmania (Viannia) braziliensis e também de Leishmania (Viannia) panamensis através da reação em cadeia da polimerase direcionada para a amplificação do espaçador transcrito interno (ITS) do gene do RNA ribossomal. A reação positiva é dada pela visualização de um fragmento amplificado de cerca de 229 nucleotídeos, para L. (V.) guyanensis e ausente para as outras duas espécies. O diagnóstico pode ser feito com o DNA extraído de cultivo do parasita, diretamente das amastigotas da borda de lesão cutânea ulcerada ou do vetor infectado pela promastigota de Leishmania. Numa etapa seguinte a região ITS do rDNA foi sequenciada para L. lainsoni, L. naiffi e quatro cepas de L. guyanensis em que duas apresentavam forma muco-cutânea e duas outras a forma cutânea da leishmaniose. Essas sequências foram comparadas com as disponíveis em banco de dados como o Genbank, resultando na confirmação dos dados obtidos de variabilidade genética por outros autores, quando utilizada a técnica de isoenzimas e ITS-RFLP. O posicionamento de L. lainsoni e L. naiffi se mostrou mais divergente que L. guyanensis, L. braziliensis e L. panamensis, dentro do subgênero Viannia. Foi também encontrada uma relação de proximidade entre os isolados de L. guyanensis IM4243 e IM4235 apresentando lesão cutâneo-mucosa. As leishmânias do sub-gênero Viannia apresentam importância epidemiológica na América do Sul, sobretudo na região amazônica e esse estudo poder ser considerado importante ao desenvolver meios de diagnóstico específico do parasita, detectando sua presença em vetores e reservatórios silvestres em certas áreas e servindo como marcador para a principal espécie responsável pelas formas clínicas de leishmaniose nessa região.