Estudo dos mecanismos de ação do G-CSF e do AMD3100 na mobilização de células-tronco e produção de citocinas em cultura primária - Araújo, Nilberto Dias de (Universidade Federal do Amazonas, 2015)
A medula óssea é o principal local descrito como reserva de subpopulações de células-tronco adultas, incluindo as células-tronco hematopoiéticas (CTH) e células-tronco mesenquimais (CTM). Diferentes fatores estimulam potencialmente a mobilização dessas células para o sangue periférico. O G-CSF e o AMD3100 têm demonstrado agir na interrupção do eixo de retenção CXCR4/SDF-1α estimulando a mobilização de CTH e CTM para a corrente sanguínea. O objetivo deste estudo foi avaliar a influência do G-CSF e do AMD3100 na mobilização de CTH e CTM para o sangue periférico e no perfil de citocinas produzidas in vitro por essas células. Foram utilizados 5 grupos com 09 camundongos machos, BALB-c. As CTH e CTM mobilizadas foram identificadas por meio de marcadores celulares específicos por citometria de fluxo. As amostras de CTH e CTM, de sangue periférico (SP) e medula óssea (MO) foram cultivadas in vitro e as citocinas foram dosadas nos sobrenadantes destas culturas pela técnica de citometria de fluxo CBA (Cytometric Bead Array System). As análises estatísticas foram realizadas com o programa GraphPad Prism 5.0. Os resultados demonstraram uma mobilização estatisticamente significativa de CTH nos camundongos tratados com PBS e que receberam 01 dose de AMD3100, e no grupo dos animais que foram tratados com G-CSF diariamente, por 04 dias consecutivos. Em relação às CTM, foi observada uma mobilização estatisticamente significativa apenas no grupo dos animais tratados com G-CSF. As culturas de medula óssea que receberam ou não estímulo (G-CSF) in vitro apresentaram células aderentes, com morfologia fibroblastóides. Nas culturas de sangue periférico, observou-se que as células apresentaram essa mesma morfologia quando foram estimuladas com G-CSF. No perfil de citocinas, houve uma maior produção de IL-6, TNF-α, IFN-γ e IL-10 na fase inicial do cultivo das CT que foram estimuladas com G-CSF, tanto em culturas da MO quanto do SP. As citocinas IL-2 e IL-4 encontraram-se mais elevadas em alguns grupos nas fases tardias do cultivo. IL-17A apresentou concentrações distintas, mantendo sua produção estável nos diferentes grupos e dias de cultivo. Dessa maneira, pode-se sugerir que, o AMD3100 induz uma rápida mobilização de células CD34+ para a circulação e o G-CSF participa direta ou indiretamente no processo de mobilização de subpopulações de CT da medula óssea para o sangue periférico, na diferenciação de CTM, e no processo de modulação e produção de citocinas.