Ontogênese, diversidade genotípica de respostas e análise proteômica de etapas envolvidas na embriogênese somática de dendezeiro (Elaeis guineensis JACQ.) - Silva, Rafael de Carvalho (Universidade Federal do Amazonas, 2016)
Este trabalho tem como objetivo avaliar respostas genotípicas durante a embriogênese somática a partir de embriões zigóticos de dendezeiros (Elaeis guineensis Jacq.), bem como avaliar a ontogênese e identificar proteínas diferencialmente expressas durante as diferentes etapas do processo embriogênico. Foram utilizados embriões zigóticos de nove genótipos: C2001, C2328, C2301, C3701, CM1115, C7201, C2528, C2501 e CN1637. Inicialmente, os embriões zigóticos foram inoculados em meio de cultura para a indução de calos (450 μM de Picloram), com subcultivos a cada 30 dias. Após 150 dias, os calos foram transferidos para dois meios de cultura visando à diferenciação e maturação de embriões somáticos: MTD -1 (0,6μM de ANA e 12,3 μM de 2-iP) e MTD-2 (40 μM de Picloram). Após 90 dias, os calos com embriões somáticos foram transferidos para o meio de regeneração, desprovido de reguladores de crescimento. Em todas as etapas os explantes foram mantidos em sala de crescimento com temperatura de 25±2ºC e sob condições de escuro. A análise mofo-anatômica foi realizada durante todo o processo embriogênico. Já a análise proteômica foi coletada amostras dos embriões zigóticos (E1), explantes intumescidos com 14 dias (E2) em meio de indução, calo primário (E3) e calo pró-embriogênico (E4). Verificou-se que os genótipos testados apresentam diferentes respostas morfogênicas in vitro. Na fase de indução, os genótipos C2501, C2001, C7201, C2528, C2328 e C3701 apresentaram os melhores resultados na formação de calos embriogênicos, com valores entre 90 e 100%. Após 90 dias de regeneração, os genótipos que apresentaram os melhores resultados para formação e regeneração de embriões somáticos foram o C2328 e CM1115. As analises anatômicas permitiram observar aos 14 dias em meio de indução a formação das primeiras divisões nas células procâmbiais e perivasculares. Essa região progrediu para a formação de massas meristemáticas, após 21 dias, indicando sua origem procambial e perivascular. Calos primários surgiram após 45 dias de cultura, seguido da progressão para calos embriogênicos aos 90 dias. A formação de proembriões, a partir das células meristemáticas, ocorreu após 135 de cultivo. Os proembriões apresentavam-se isolados do tecido de origem, pelo leve espessamento da parede celular, indicando sua origem unicelular. Quando transferidos para fase de maturação, nos meios de cultura MTD -1 (0,6μM de ANA e 12,3 μM 2-iP) e MTD-2 (40 μM picloran), observou-se a regeneração de embriões somáticos em diferentes estágios de desenvolvimento (globular-torpedo). Os embriões diferenciados apresentaram protoderme, cordões de procâmbio e plúmula. Em seguida foram transferidos para o meio de cultura isento de reguladores de crescimento (fase de regeneração de plantas), no qual foi observada a conversão dos embriões somáticos em plantas. O acúmulo de amido durante o processo de embriogênese somática concentrou-se próximos aos centros de intensa divisão celular, e no córtex dos calos primários e embriogênicos. No entanto, nos diferentes estágios de embriões somáticos não foi observado o acúmulo de amido. Já a análise proteômica identificou proteínas envolvidas no processo de aquisição da competência embriogênica. As proteínas foram categorizadas em sete grupos de acordo com sua função biológica, bem como pela participação em vias metabólicas distintas: 1) proteínas expressas em condições de estresse; 2) proteínas envolvidas no ciclo celular; 3) proteínas envolvidas no acúmulo de amido; 4) proteínas do metabolismo energético; 5) proteína do metabolismo do nitrogênio; 6) processamento das proteínas; e 7) proteínas do embrião zigótico. O conhecimento da reconstituição in vitro dos eventos, fisiológicos, genotípicos, ontogênicos e bioquímicos, que envolvem o processo de embriogênese somática em E. guineenses, permiti um maior entendimento da clonagem da espécie, seja para a produção de mudas em escala, seja para acelerar programas de melhoramento genético da cultura.