Avaliação da resposta humoral estimulada por probiótico contendo a 'Proteína 1' de Superfície De Merozoíto de Plasmodium falciparum (pf-MSP1-19) - Alves, Késsia Caroline Souza (Universidade Federal do Amazonas, 2019)
Bacillus subtilis é uma bactéria Gram-positiva, não patogênica, que recebeu o status GRAS (Generally Regarded As Safe) pelo FDA Americano. Quando exposta à situação adversa o B. subtilis produz um tipo de célula morfologicamente distinta, denominada de esporo. Pesquisas têm destacado o potencial do uso de esporos como delivery vacinal, sendo estes capazes de estimular respostas imunes sistêmicas e localizadas, promovendo ainda elevação da resposta humoral quando coadministrado com antígenos acoplados ou integrados à superfície dos esporos. Atualmente, ainda não há uma vacina eficaz para o combate à malária e dentre os antígenos estudados, a proteína Pf-MSP1-19 de Plasmodium falciparum se mostra um dos mais promissores e elucidados candidatos vacinais. Diante do exposto, este trabalho teve como objetivo principal avaliar a resposta imune frente ao antígeno rPf-MSP1-19 de Plasmodium falciparum, presente na superfície dos esporos de Bacillus subtillis. Materiais e métodos: Para isso, foram realizados separação por renografina e quantificação por citometria de fluxo dos esporos de Bacillus subtillis recombinados com rPf-MSP1-19 e esporos Wild Type (WT), seguido pelo acoplamento químico da rPf-MSP1-19 à superfície dos esporos WT autoclavados. Com as ferramentas produzidas, camundongos Balb/c foram imunizados via oral e intraperitoneal e os soros obtidos avaliados por ELISA indireto. Resultados: Neste trabalho o acoplamento químico utilizando EDC e NHS se mostrou o melhor método para adsorção da proteína rPf-MSP1-19 à superfície de esporos. Uma nova abordagem para quantificação de esporos foi aplicada usando Citometria de Fluxo e Beads Trucount™ demonstrando maior potencial de eficiência e sensibilidade. Foi observado que houve a degradação da proteína rPfMSP1-19 quando expressa diretamente na superfície do esporo, pelo método recombinante. Quanto as imunizações orais, não foi possível obter resposta imune frente ao antígeno acoplados aos esporos quimicamente e nem a Bacillus subtillis recombinante. Entretanto as imunizações intraperitoneais induziram níveis elevados de IgG anti- rPf-MSP1-19 no grupo imunizado com rPf-MSP1-19 acoplada à superfície dos esporos WT autoclavados semelhante ao controle positivo. Sugerindo o uso de esporos de B. subtilis Wild Type autoclavados como alternativa de delivery e de adjuvante de antígenos para imunizações com fins experimentais, podendo no futuro ser aplicado em imunizações em humanos.