Avaliação in vitro da atividade leishmanicida de fungos isolados de amostras de solo da região amazônica - Alves, Tarcila de Araújo (Universidade Federal do Amazonas, 2019)
A Leishmaniose Tegumentar Americana (LTA) é uma doença infecto-parasitária com grande disseminação no Continente Americano. Dessa forma, a bioprospecção de novos agentes anti leishmania é essencial para o desenvolvimento de fármacos mais eficientes e com menores efeitos colaterais para pacientes de LTA que os utilizados atualmente. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho é testar a ação de sobrenadantes de 6 espécies fúngicas (Aspergillus calidoustus; A. fumigatus; Fusarium solani; Penicillium citrinum; P. esclerotiorum e P. purpurogenum), isoladas do solo amazônico contra formas promastigotas e amastigotas de Leishmania amazonensis e L. guyanensis. Foram realizados ensaios in vitro contra promastigotas e amastigotas incubadas com sobrenadantes de cultura das 6 espécies fúngicas nas concentrações 125, 250, 500 e 750 µg/mL. Como controle negativo foi utilizado meio de cultura (RPMI e Dmen) e Pentamidina (30 mg/mL). Estes sobrenadantes também foram avaliados quanto a sua citoxidade sobre células humanas de linhagem MRC-5 e quanto à produção de NO. Antes de iniciar os ensaios in vitro foi feita uma curva de crescimento onde foi o terceiro dia como o melhor para realização dos bioensaios com os promastigotas de L. amazonensis e L.guyanensis. Foi observado que A. calidoustus (CI50%=6382 µg/mL), F.solani (CI50%=739,2µg/mL) e P.purpurogenum (CI50%=503,67 µg/mL) durante o ensaio de atividade anti promastigota. A. calidoustus foi efetivo na concentrações de 500 µg/mL e 750 µg/mL apresentou atividade contra promastigotas de L. amazonensis em 48 e 72 horas (p<0.05, ANOVA dois critérios; pós-hoc Tukey). F.solani foi efetivo somente na concentração de 750 µg/mL em 72 horas contra promastigotas de L. amazonensis. Já P. purpurogenum foi efetivo tanto nas concentrações de 500 µg/mL quanto 750 µg/mL também contra promastigotas de L. amazonensis em 72 horas. A. fumigatus foi o único sobrenadante com ação contra promastigotas de L. guyanensis (CI50=654,6 µg/mL). P. citrinum e P. esclerotiorum não apresentação ação contra promastigotas de nenhuma espécie. Em seguida, foram feitos teste de citotoxicidade contra fibroblastos humanos, onde apenas A. fumigatus foi citotóxico e excluído nos testes posteriores. Em relação aos experimentos com amastigotas somente A. calidoustus e F. solani apresentaram atividade contra amastigotas de L. guyanensis reduzindo o número de parasitas no interior de macrófagos (RAW 264.7) após 24 horas de incubação com 750 µg/mL em relação ao controle negativo (p<0.05, ANOVA: um critério; pós-hoc Tukey). Quando avaliados quanto à produção de NO em macrófagos previamente estimulados por LPS, todas as 6 espécies exibiram aumento significativo (p=0.01, ANOVA) na produção de NO em baixas concentrações, porém o efeito não foi observado em concentrações mais altas. Entretando, este mesmo efeito não foi visto nos sobrenadantes de F. solani e P. purpurogenum durante a dosagem de NO em macrófagos infectados com amastigotas de L. amazonensis e L. guyanensis e tratados com os sobrenadantes nas concentrações de 500 e 750 µg/mL. Somente os sobrenadantes de cultura de A. calidoustus na concentração de 750 µg/mL apresentaram efeito, diminuindo significativamente a produção de NO em resposta a amastigotas de L. amazonensis.