Clonagem e expressão da enzima β-glucuronidase obtida de uma biblioteca metagenômica de terra preta de índio - Batalha Junior, Minerval de Oliveira (Universidade Federal do Amazonas, 2020)
As enzimas estão presentes em todas as células vivas, onde atuam como catalisadoras biológicas no controle metabólico de todos os organismos vivos. Os microrganismos ganham cada vez mais destaque como produtor dessas moléculas biocatalizadoras. A técnica metagenômica utilizando ferramentas moleculares e da bioinformática torna possível descobrir novas enzimas a partir de uma amostra ambiental qualquer. A Terra Preta de Índio é encontrada em algumas regiões da Amazônia, apresentando alto teor de matéria orgânica devido à alta atividade biológica neste ambiente. A partir de uma biblioteca metagenômica de Terra Preta de Índio construída e depositada na Universidade Federal do Amazonas, foi possível identificar um grupo de enzimas hidrolases. Dentro deste grupo foi rastreada a enzima β-glucuronidase que tem papel fundamental no metabolismo bacteriano, como gene repórter em transformação de plantas, em teste antidoping e na biotransformação da molécula de glicirrizina em derivados que agrega maior valor econômico para indústria farmacêutica e cosmética. A β-glucuronidase foi clonada e expressa em E coli. BL21(DE3) pLysS utilizando como vetor o plasmídeo pET28a(+) Promega. Sua massa molecular foi estimada em 61 kDa. Sua atividade catalítica em tampão fosfato de sódio 100mM utilizando como substrato X-gal (20 mg/mL) (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopiranosídeo) foi melhor a 40 oC e pH 7. Com parâmetros cinéticos aparentes Km e Vmax 4,08 mg e 0,45 mn.min-1 respectivamente. Os resultados deste projeto irão contribuir para o melhor estudo da capacidade catalítica, comparar sua capacidade hidrolítica com outras β-glucuronidases comerciais e desta forma torná-la mais adequada para aplicação em diferentes ramos biotecnológicos.