Análise do uso de Bacillus subtilis como hospedeiro para expressão de VHH anti-fosfolipase de Bothrops jararacussu - Souza, Caio Coutinho de (Universidade Federal do Amazonas, 2023)
Os Homodímeros Variáveis de Cadeia Pesada (VHHs), também chamados de nanocorpos de camelídeos, são fragmentos de anticorpos IgG incomuns e exclusivos de animais da família camelidae, que atingem alta afinidade e especificidade de ligação ao antígeno. Atualmente são agentes potenciais para aplicações no tratamento ou diagnóstico em casos de acidentes ofídicos. Diferentes hospedeiros já produziram nanocorpos recombinantes, porém ainda há desafios nesta produção que precisam ser superados.Visando contornar estes problemas, exploramos o uso de Bacillus subtilis para a expressão de VHHs. No capítulo I desta dissertação apresentamos um artigo de revisão que inicialmente levantou os principais estudos que justificam a escolha de B. subtilis na pesquisa e nas indústrias. Correlacionamos às características deste hospedeiro atreladas às variadas estratégias de engenharia genética para produzir biomoléculas de forma eficiente e econômica. O capítulo II aborda os resultados decorrentes da utilização de B. subtilis cepa KO7 como hospedeiro para produzir um VHH anti-fosfolipase. O B. subtils KO7 foi transformado com o plasmídeo pHEN1 e foi feita a posterior indução da expressão da proteína, a confirmação da expressão foi realizada pela técnica de western-blot e a funcionalidade da proteína foi avalida via ensaio de citometria de fluxo. Os resultados demonstraram que a transformação utilizando o vetor pHEN1 foi eficiente e as induções utilizando o indutor IPTG ou a lactose foram satisfatórias. A proteína VHH foi expressa na porção solúvel do lisado bacteriano apresentando uma massa molecular de aproximadamente 11 KDa. Observou-se um alto reconhecimento do VHH anti-fosfolipase contra as proteínas miotóxicas Bothropstoxina I (BthTX-I) e Bothropstoxina II (BthTX-II) de Bothrops jararacussu, constatando que B. subtilis KO7 é um potencial hospederio para produzir VHHs solúveis e com sua funcionalidade preservada para posterior uso clínico.