Dissertação

Caracterização da cinética de captação de glutamato por cromatografia líquida de alta eficiência em tecido retiniano

The present study describes a simple and efficient method utilizing high performance liquid chromatography (HPLC) coupled to fluorescence detection for the determination of kinetic parameters of glutamate uptake in nervous tissue. Retinal tissue obtained from 7-day-old chicks was incubated to known...

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Autor principal: MORAES, Edinaldo Rogério da Silva
Grau: Dissertação
Idioma: por
Publicado em: Universidade Federal do Pará 2012
Assuntos:
Captação de glutamato
Cromatografia líquida de alta eficiência
Retina
CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA
Acesso em linha: http://repositorio.ufpa.br/jspui/handle/2011/2861
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spelling ir-2011-28612017-12-22T14:10:54Z Caracterização da cinética de captação de glutamato por cromatografia líquida de alta eficiência em tecido retiniano MORAES, Edinaldo Rogério da Silva SILVA, Anderson Manoel Herculano Oliveira da http://lattes.cnpq.br/8407177208423247 Captação de glutamato Cromatografia líquida de alta eficiência Retina CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::BIOQUIMICA The present study describes a simple and efficient method utilizing high performance liquid chromatography (HPLC) coupled to fluorescence detection for the determination of kinetic parameters of glutamate uptake in nervous tissue. Retinal tissue obtained from 7-day-old chicks was incubated to known concentrations of glutamate (50-2000 μM) for 10 minutes, and the levels of the o-phtaldehyde (OPA)-derivatized neurotransmitter in the incubation medium were measured. By assessing the difference between initial and final concentrations of glutamate in the medium, a saturable uptake mechanism was characterized (Km = 8,2 e Vmax = 9,8 nmol/mg protein/minute). This measure was largely sodium- and temperature-dependent, strongly supporting that the mechanism for concentration decrements is indeed uptake by high-affinity transporters. Added to this, our results also demonstrated that zinc chloride (an inhibitor of glutamate/aspartate transporters) evoked a concentration dependent decrease in the glutamate uptake, demonstrating an elevate specificity of our methodology. Overall, the present work characterizes an alternative methodology to evaluate glutamate uptake in nervous tissue using HPLC. This approach could be an important tool for studies associated to the characterization of glutamate transport related with central nervous system injury CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior O presente estudo descreve um método eficiente e simples utilizando cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) acoplada a detector de fluorescência para determinação dos parâmetros cinéticos da captação de glutamato (glu) no sistema nervoso central (SNC). O tecido retiniano embrionário de ave com sete dias de desenvolvimento foi incubado com concentrações conhecidas de glu (50-500 μM) por dez minutos. Os níveis do aminoácido derivado a partir de ortoftaldeído (OPA) no meio de incubação foram mensurados. Após avaliar a diferença entre a concentração de glu inicial e a final no meio, foi determinada a saturação do mecanismo de captação (Km = 8,2 e Vmax = 9,8 nmol/mg proteína/minuto). Estas determinações foram dependentes e independentes de sódio e temperatura, indicando que o mecanismo que regula a diminuição dos níveis de glu no SNC, é a captação via transportadores de alta afinidade. Além disso, o cloreto de zinco (ZnCl) (um inibidor do transportador glu/aspartato) foi utilizado em diversas concentrações e evocou diminuição da captação de glu. Com isto, destaca-se a elevada aplicabilidade desta metodologia. Além deste trabalho caracterizar metodologia alternativa para avaliar captação de glu no SNC usando CLAE, também pode ser importante ferramenta para estudos relacionados à caracterização do transporte do neurotransmissor durante injúrias no SNC. 2012-07-23T15:41:13Z 2012-07-23T15:41:13Z 2011-08-19 Dissertação MORAES, Edinaldo Rogério da Silva. Caracterização da cinética de captação de glutamato por cromatografia líquida de alta eficiência em tecido retiniano. 2011. 68 f. Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Pará, Instituto de Ciências Biológicas, Belém, 2011. Programa de Pós-Graduação em Neurociências e Biologia Celular. http://repositorio.ufpa.br/jspui/handle/2011/2861 por Acesso Aberto application/pdf Universidade Federal do Pará Brasil Instituto de Ciências Biológicas UFPA Programa de Pós-Graduação em Neurociências e Biologia Celular
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