Dissertação

Expressão gênica e viabilidade de folículos pré-antrais submetidos à vitrificação do córtex ovariano de Sapajus apella (macacas-prego)

Vitrification is a biotech that has been increasingly showing promise in several species, among them domestic ruminants (such as sheep, goats and cows) and in nonhuman primates (NHP) (as cynomologus and rhesus), and consists in reducing ultra-rapid temperature by the presence of high concentrations...

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Autor principal: SANTANA, Luana de Nazaré da Silva
Grau: Dissertação
Idioma: por
Publicado em: Universidade Federal do Pará 2017
Assuntos:
Macaco-prego
Criopreservação de orgãos, tecidos, etc.
Tecidos (Anatomia e fisiologia)
Reprodução animal
Sapajus apella
Vitrificação
Agente crioprotetor (ACP’s)
Reação em cadeia da polimerase
Antioxidantes
CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA::REPRODUCAO ANIMAL
CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MORFOLOGIA::HISTOLOGIA
Acesso em linha: http://repositorio.ufpa.br/jspui/handle/2011/8463
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spelling ir-2011-84632018-04-24T12:32:50Z Expressão gênica e viabilidade de folículos pré-antrais submetidos à vitrificação do córtex ovariano de Sapajus apella (macacas-prego) SANTANA, Luana de Nazaré da Silva SANTOS, Regiane Rodrigues dos http://lattes.cnpq.br/0500967766886604 DOMINGUES, Sheyla Farhayldes Souza http://lattes.cnpq.br/2794753357251149 Macaco-prego Criopreservação de orgãos, tecidos, etc. Tecidos (Anatomia e fisiologia) Reprodução animal Sapajus apella Vitrificação Agente crioprotetor (ACP’s) Reação em cadeia da polimerase Antioxidantes CNPQ::CIENCIAS AGRARIAS::MEDICINA VETERINARIA::REPRODUCAO ANIMAL CNPQ::CIENCIAS BIOLOGICAS::MORFOLOGIA::HISTOLOGIA Vitrification is a biotech that has been increasingly showing promise in several species, among them domestic ruminants (such as sheep, goats and cows) and in nonhuman primates (NHP) (as cynomologus and rhesus), and consists in reducing ultra-rapid temperature by the presence of high concentrations of cryoprotective agents (PCA's) in liquid nitrogen. Thus the aim of this study was to develop a methodology for cryopreservation by vitrification of preantral follicles (PF's) in Sapajus apella. For this purpose, we used females (n = 9) adult Sapajus apella squad belonging to the National Primate Center (CENP). Samples were taken from the ovarian cortex by laparotomy so as not to destabilize the animals reproducibly. The fragments exposed to 8 different treatments: Ethylene glycol (EG) + 40% Sucrose (Sac) dissolved in 0.5 M TCM-199, added to Selenium (2,5, 5 or 10 ng / ml) or Trolox (25, 50 or 100 mM). Following exposure to cryoprotective agents was analyzed follicular viability before and after vitrification, from the follicular morphology, expression of Hsp70 genes, Erp29, Erp60 SOD1 and through the analysis by Polymerase Chain Reaction (PCR), in addition to performing measurement of oxidative stress thru the TEAC (English Total Equivalent Antioxidant Activity). The analyzes showed that vitrification allowed the maintenance of follicular viability by previous exposure to concentrations of ACP's alevadas, especially when supplemented with 50 mM trolox (which resulted in high follicular survival rates) and increased expression of the antioxidant enzyme SOD1. While in the absence of it was observed an increase in rates of follicles degenerate and vacuolated, and reduced expression of the antioxidant enzyme SOD1 and increased expression of chaperone Erp29. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior A vitrificação é uma biotécnica que tem se mostrando cada vez mais promissora em várias espécies, dentre elas ruminantes domésticos (como ovelhas, cabras e vacas), e em primatas não humanos (PNH) (como o cynomologus e rhesus), e consiste na redução ultra-rápida da temperatura mediante a presença de altas concentrações de agentes crioprotetores (ACP’s) em nitrogenio liquido. Desta forma o objetivo deste estudo foi o desenvolvimento de uma metodologia de criopreservação por vitrificação de Folículos Ovarianos Pré-antrais (FOPA’s) em Sapajus apella. Para tanto, foram utilizadas femêas (n=9) adultas de Sapajus apella pertencentes ao plantel do Centro Nacional de Primatas (CENP). Foram realizadas coletas de córtex de tecido ovariano por meio de laparotomia exploratória de modo a não inviabilizar o animal reprodutivamente. Os fragmentos expostos a 8 tratamentos diferentes: Etilenoglicol (EG) 40% + Sacarose (Sac) 0,5 M dissolvidos em TCM-199 adicionados ou não de Selenio (2,5, 5 ou 10 ng/ml) ou Trolox (25, 50 ou 100 mM). Após a exposição aos agentes crioprotetores foi analisada a viabilidade folicular antes e após a vitrificação, a partir da morfologia folicular, expressão dos genes Hsp70, Erp29, Erp60 e Sod1 através da análise por Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), além de realizar a dosagem de estresse oxidativo atravéz da TEAC (do inglês Total Equivalent Antioxidant Activity). As análises mostraram que a vitrificação permitiu a manutenção da viabilidade folícular mediante a exposição previa a elevadas concentrações de ACP’s, principalmente quando suplementados com trolox a 50 μM (que resultou em elevadas taxas de sobrevivência folicular) e aumento na expressão da enzima antioxidante Sod1. Enquanto na ausência do mesmo foi observado o aumento nas taxas de folículos degenerados e com vacuolização citoplasmática, além da redução na expressão da enzima antioxidante Sod1 e elevação da expressão da chaperona Erp29. 2017-05-19T14:44:20Z 2017-05-19T14:44:20Z 2012-05-25 Dissertação SANTANA, Luana de Nazaré da Silva. Expressão gênica e viabilidade de folículos pré-antrais submetidos à vitrificação do córtex ovariano de Sapajus apella (macacas-prego). 2012. 97 f. Dissertação (Mestrado) - Universidade Federal do Pará, Núcleo de Ciências Agrárias e Desenvolvimento Rural, Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária, Universidade Federal Rural da Amazônia, Belém, 2012. Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal. http://repositorio.ufpa.br/jspui/handle/2011/8463 por Acesso Aberto application/pdf Universidade Federal do Pará Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária Universidade Federal Rural da Amazônia Brasil Campus Universitário de Castanhal UFPA EMBRAPA UFRA Programa de Pós-Graduação em Ciência Animal
institution Repositório Institucional - Universidade Federal do Pará
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description Vitrification is a biotech that has been increasingly showing promise in several species, among them domestic ruminants (such as sheep, goats and cows) and in nonhuman primates (NHP) (as cynomologus and rhesus), and consists in reducing ultra-rapid temperature by the presence of high concentrations of cryoprotective agents (PCA's) in liquid nitrogen. Thus the aim of this study was to develop a methodology for cryopreservation by vitrification of preantral follicles (PF's) in Sapajus apella. For this purpose, we used females (n = 9) adult Sapajus apella squad belonging to the National Primate Center (CENP). Samples were taken from the ovarian cortex by laparotomy so as not to destabilize the animals reproducibly. The fragments exposed to 8 different treatments: Ethylene glycol (EG) + 40% Sucrose (Sac) dissolved in 0.5 M TCM-199, added to Selenium (2,5, 5 or 10 ng / ml) or Trolox (25, 50 or 100 mM). Following exposure to cryoprotective agents was analyzed follicular viability before and after vitrification, from the follicular morphology, expression of Hsp70 genes, Erp29, Erp60 SOD1 and through the analysis by Polymerase Chain Reaction (PCR), in addition to performing measurement of oxidative stress thru the TEAC (English Total Equivalent Antioxidant Activity). The analyzes showed that vitrification allowed the maintenance of follicular viability by previous exposure to concentrations of ACP's alevadas, especially when supplemented with 50 mM trolox (which resulted in high follicular survival rates) and increased expression of the antioxidant enzyme SOD1. While in the absence of it was observed an increase in rates of follicles degenerate and vacuolated, and reduced expression of the antioxidant enzyme SOD1 and increased expression of chaperone Erp29.
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