Clonagem e expressão do CDNA codificador do  hormônio de crescimento de tambaqui (Colossoma  macropomum) na levedura Pichia pastoris

Pinto, Elson Antonio Sadalla; https://lattes.cnpq.br/9786797594989755

Dissertação

Clonagem e expressão do CDNA codificador do hormônio de crescimento de tambaqui (Colossoma macropomum) na levedura Pichia pastoris

Estudos genéticos envolvendo a busca, clonagem e expressão de genes codificadores de proteínas associadas a importantes processos fisiológicos e características vantajosas do ponto de vista econômico têm tornado as pesquisas biotecnológicas cada vez mais promissoras. Pela sua importância zootécnica,...

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Autor principal:	Pinto, Elson Antonio Sadalla
Outros Autores:	https://lattes.cnpq.br/9786797594989755
Grau:	Dissertação
Idioma:	por
Publicado em:	Universidade Federal do Amazonas 2025
Assuntos:	Tambaqui (Peixe) - Pesquisa Peixes - Crescimento CIENCIAS BIOLOGICAS Hormônio de crescimento Tambaqui Expressão heteróloga Pichia pastoris Growth hormone Heterologous expression
Acesso em linha:	https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/10663

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spelling	oai:https:--tede.ufam.edu.br-handle-:tede-106632025-02-13T05:07:43Z Clonagem e expressão do CDNA codificador do hormônio de crescimento de tambaqui (Colossoma macropomum) na levedura Pichia pastoris Cloning and expression of the CDNA coding growth hormone from tambaqui (Colossoma macropomum) in the yeast Pichia pastoris Pinto, Elson Antonio Sadalla Porto, Jorge Ivan Rebelo https://lattes.cnpq.br/9786797594989755 http://lattes.cnpq.br/7563186505089160 Silva, Carlos Gustavo Nunes da Mariuba, Luis Andre Morais Tambaqui (Peixe) - Pesquisa Peixes - Crescimento CIENCIAS BIOLOGICAS Hormônio de crescimento Tambaqui Expressão heteróloga Pichia pastoris Growth hormone Heterologous expression Estudos genéticos envolvendo a busca, clonagem e expressão de genes codificadores de proteínas associadas a importantes processos fisiológicos e características vantajosas do ponto de vista econômico têm tornado as pesquisas biotecnológicas cada vez mais promissoras. Pela sua importância zootécnica, os genes codificadores do hormônio de crescimento (GH) de diversas espécies de peixes têm sido isolados, clonados e expressos em sistemas de expressão heteróloga. O tambaqui (Colossoma macropomum), espécie de peixe amazônica considerada promissora para a aquicultura, tem sido objeto de extensas pesquisas biotecnológicas mirando a ampliação da capacidade produtiva da espécie. Neste trabalho, objetivou-se expressar o cDNA do GH de tambaqui na levedura metilotrófica Pichia pastoris. A sequência nucleotídica da região estrutural do cDNA do GH de tambaqui foi otimizada com os códons preferenciais de P. pastoris e obtida por síntese química e subclonada no vetor de expressão e secreção pPIC9. A expressão foi regulada pelo promotor AOX1 e a proteína recombinante endereçada para o sobrenadante da cultura por ação do peptídio sinal fator α de Saccharomyces cerevisiae. A análise em gel SDS-PAGE revelou a presença de uma banda proteica de aproximadamente 23 kDa, a qual foi confirmada ser o GH recombinante de tambaqui (rtGH) através de análise Western blotting. Futuramente, rtGH deverá ser analisado quanto a sua eficiência na aceleração do crescimento de juvenis de tambaqui com vista à possibilidade de uso na produção aquícola, o que decerto representará inovação nas tecnologias de cultivos de peixes nativos da Amazônia. Genetic studies involving search, cloning and expression of protein-coding genes associated with important physiological processes and advantageous characteristics from an economic point of view have made biotechnological research increasingly promising. Due to their zootechnical importance, the genes encoding growth hormone (GH) from several fish species have been isolated, cloned and expressed in heterologous expression systems. Tambaqui (Colossoma macropomum), an Amazonian fish species considered promising for aquaculture, has been the subject of extensive biotechnological research aimed at expanding the species' productive capacity. In this work, the objective was to express the tambaqui GH cDNA in the methylotrophic yeast Pichia pastoris. The nucleotide sequence of the structural region of the tambaqui GH cDNA was optimized with the preferred codons of P. pastoris and obtained by chemical synthesis and subcloned into the pPIC9 expression and secretion vector. Expression was regulated by the AOX1 promoter and the recombinant protein addressed to the culture supernatant by the action of the signal peptide factor α from Saccharomyces cerevisiae. SDS-PAGE gel analysis revealed the presence of a protein band of approximately 23 kDa, which was confirmed to be recombinant tambaqui GH (rtGH) through Western blotting analysis. In the future, rtGH should be analyzed for its efficiency in accelerating the growth of tambaqui juveniles with a view to the possibility of use in aquaculture production, which will certainly represent innovation in native fish farming technologies in the Amazon. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento Pessoal e Nível Superior Submissão tranquila. 2025-02-12T17:49:38Z 2012-08-27 Dissertação PINTO, Elson Antonio Sadalla. Clonagem e expressão do CDNA codificador do hormônio de crescimento de tambaqui (Colossoma macropomum) na levedura Pichia pastoris. 2012. 79 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus (AM), 2012. https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/10663 por Acesso Aberto https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ application/pdf Universidade Federal do Amazonas Instituto de Ciências Biológicas Brasil UFAM Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
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Clonagem e expressão do CDNA codificador do hormônio de crescimento de tambaqui (Colossoma macropomum) na levedura Pichia pastoris

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