O câncer do colo do útero é a segunda causa de câncer mais comum entre as mulheres em
todo o mundo e a quarta maior causa de morte entre as mulheres no Brasil. O papilomavírus
humano (HPV) exerce um papel central nessa doença, pois sua infecção é considerada
condição necessária para desenvolver mais de 90% dos casos de câncer de colo uterino. O
tratamento padrão da doença consiste em radioterapia com quimioterapia à base de
cisplatina e, desde 2014, o SUS disponibiliza as vacinas Gardasil (contra HPVs 6, 11, 16, e
18) e Cervarix (contra HPVs 16 e 18). No entanto, a eficácia dessas vacinas não é evidente
para a terapia de pacientes com câncer cervical. A carcinogênese associada ao HPV
fornece um modelo clássico para terapias de câncer baseadas em silenciamento gênico por
RNA (RNAi), pois sua progressão depende significativamente dos oncogenes virais E6 e E7.
Graças a isso, a maioria das estratégias de terapia baseadas em RNAi desenvolvidas até o
momento utilizam moléculas de RNAi direcionadas contra os genes E6 e/ou E7, obtendo de
50 a 80% de silenciamento. O objetivo desta pesquisa é propor uma terapia para o
tratamento de lesões cervicais causadas por HPV 16 e HPV 18 baseada em siRNA e
circRNA, desenhados com auxílio de ferramentas de bioinformática e testados in silico e in
vitro. Os testes in silico foram realizados com ferramentas de bioinformática que analisaram
a estabilidade termodinâmica, possíveis efeitos off-target e a similaridade com moléculas de
RNAi já patenteadas. Os testes in vitro, por sua vez, consistiram em transfecção das
moléculas sintetizadas de siRNA e circRNA em linhagens celulares comerciais HeLa (HPV
18 positiva), Caski (HPV 16 positiva) e C-33a (câncer cervical HPV negativo), seguida de
qPCR e análises estatísticas. Para o silenciamento por siRNA, foi desenvolvida uma
ferramenta para seleção de sequências de siRNA baseada em parâmetros físico-químicos,
que permitiu também verificar a viabilidade dos siRNAs escolhidos. Foi observada
similaridade dos siRNAs com alguns alvos já descritos em patentes registradas no Instituto
Nacional de Propriedade Industrial – INPI. Os testes in vitro realizados até o momento
mostraram que a terapia conseguiu reduzir significativamente a expressão dos genes E6 e
E7 em células HeLa. Todavia, testes adicionais com circRNA e linhagens celulares Caski
(HPV 16 positiva) e C-33a (câncer cervical HPV negativo) ainda estão sendo realizados para
verificar a viabilidade da terapia proposta por este trabalho.
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