Potencial Antagônico de Trichoderma spp. associados a dsRNA contra Colletotrichum guaranicola (Albuq.)
O guaran´a (Paulinia cupana) ´e uma das mais importantes culturas do Estado do Amazonas. Comercialmente, sua utilizac¸ ˜ao ´e maior nos refrigerantes gaseificados, no entanto, a ind´ustria do guaran´a vem crescendo e diversificando seus produtos, inclusive no mercado internacional. A principal do...
| Autor principal: | Figueirêdo, Girlene Soares de |
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| Outros Autores: | http://lattes.cnpq.br/5095068399570934 |
| Grau: | Tese |
| Idioma: | por |
| Publicado em: |
Universidade Federal do Amazonas
2015
|
| Assuntos: | |
| Acesso em linha: |
http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/4491 |
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oai:https:--tede.ufam.edu.br-handle-:tede-44912016-06-10T12:54:17Z Potencial Antagônico de Trichoderma spp. associados a dsRNA contra Colletotrichum guaranicola (Albuq.) Figueirêdo, Girlene Soares de Azevedo, João Lúcio de http://lattes.cnpq.br/5095068399570934 http://lattes.cnpq.br/2302429651674634 Martins, Mayra Kassawara Tanaka, Francisco Andre Ossamu Trichoderma Fungos fitopatogênicos Pragas agrícolas – Controle biológico Guaraná - Doenças e pragas - Controle biológico Antracnose CIÊNCIAS BIOLÓGICAS O guaran´a (Paulinia cupana) ´e uma das mais importantes culturas do Estado do Amazonas. Comercialmente, sua utilizac¸ ˜ao ´e maior nos refrigerantes gaseificados, no entanto, a ind´ustria do guaran´a vem crescendo e diversificando seus produtos, inclusive no mercado internacional. A principal doenc¸a que afeta a cultura do guaran´a ´e a antracnose, sendo seu agente etiol´ogico o fitopat´ogeno Colletotrichum guaranicola. A principal forma de controle da antracnose ´e o emprego de fungicidas qu´ımicos, por´em, em algumas regi˜oes, que adquiriram o reconhecimento de cultura orgˆanica, esta medida de controle n˜ao se adequa `as necessidades da produc¸ ˜ao. As esp´ecies do gˆenero Trichoderma, s˜ao antagonistas utilizadas eficazmente no controle biol´ogico de algumas esp´ecies fitopatogˆenicas, incluindo o gˆenero Colletotrichum. A presenc¸a de dsRNAs ´e frequente em fungos, sendo relatada na literatura muitas pesquisas associando-os com v´arios aspectos nestes hospedeiros: fen´otipos hipovirulentos, alterac¸ ˜oes morfol´ogicas, o fen´otipo “killer” em leveduras, ou ainda, a nenhuma alterac¸ ˜ao nestes microrganismos. Esta pesquisa teve por objetivos investigar a presenc¸a e influˆencia de dsRNA sobre o potencial antagˆonico de Trichoderma spp. contra C. guaranicola. Foram analisados 100 isolados de Trichoderma spp., sendo que apenas um apresentou dsRNA. A esp´ecie foi determinada por sequenciamento da regi˜ao ITS do rDNA e seus aspectos micromorfol´ogicos (microscopia ´optica e eletrˆonica de varredura) como Trichoderma asperellum. Procedeu-se a purificac¸ ˜ao deste material por meio de cromatografia em coluna de celulose e a digest˜ao com nucleases (DNAse I e nuclease S1). Para analisar a poss´ıvel interferˆencia destas part´ıculas no potencial antagˆonico dos isolados de Trichoderma, eliminou-se o dsRNA do isolado infectado com a substˆancia desoxicolato de s´odio, adicionada ao meio BDA na concentrac¸ ˜ao de 200 mg/mL. Testes de antagonismo in vitro (pelo m´etodo de pareamento em placa), revelaram diferenc¸a entre as linhagens is´ogenas (com e sem dsRNA) contra o fitopat´ogeno. O teste in vivo, pelo m´etodo de adic¸ ˜ao de esporos de antagonista e fitopat´ogenos em plantas de Mucuna aterrima, n˜ao apresentou diferenc¸a estat´ıstica entre as li-nhagens. Morfologicamente houve alterac¸ ˜oes entre os isolados com e sem dsRNA, sendo que os sem dsRNA, apresentaram maior crescimento micelial e maior produc¸ ˜ao de esporos. Diante dos resultados obtidos concluiu-se que o dsRNA presente em T. asperellum interfere no seu potencial antagonista em testes in vitro, mas n˜ao no seu desempenho em testes in vivo. Guaran´a is one of the most important crops in the state of Amazonas. Commercially, their use is as refrigerant, however, the industry of Guaran´a has been growing and diversifying its products, including the foreign market. The main disease that affects the culture of guarana is anthracnose, and its etiologic agent, is the pathogen Colletotrichum guaranicola. The main form of anthracnose control is the use of chemical fungicides, but in some regions, which have gained the recognition of organic agriculture, this control measure is not appropriate to the needs of production. Several species of genus Trichoderma, are antagonists used effectively in biological control of some plant pathogens, including the genus Colletotrichum. The presence of dsRNAs is common in fungi, being reported in the literature many studies associating them with various aspects of these hosts: hipovirulence morphological changes, the phenotype “ killer”in yeast, and others changes in these microorganisms. The main objective of this research was investigate the presence and influence of dsRNA on the antagonistic potential of Trichoderma spp. against C. guaranicola. We analyzed 100 isolates of Trichoderma spp., and only one presented dsRNA. The species was determined by sequencing the ITS region of rDNA and its micromorphological aspects (optical and electron microscopy) as Trichoderma asperellum. We proceeded to purify this material by column chromatography on cellulose and digestion with nucleases (DNase I and nuclease S1). To analyze the possible interference of these particles in the antagonistic potential of Trichoderma, the dsRNA was eliminated with sodium deoxycholate, added to PDA medium at a concentration of 200 mg / mL. Tests of antagonism in vitro (by the method of pairing in Petri dishes), showed a difference between inbred strains (with and without dsRNA) against the pathogen. In vivo tests, in plants of Mucuna aterrima, showed no statistical difference between the isolates with and without dsRNA. Morphological alterations were observed betweem isolates with and without dsRNA, the absence of dsRNA showed higher mycelial growth and higher production of spores. Based on these results it was concluded that dsRNA present in T. asperellum interfere in its potential antagonist in vitro tests, but not to its performance in vivo tests. CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico 2015-07-23T14:59:45Z 2010-08-25 Tese FIGUEIRÊDO, Girlene Soares de. Potencial Antagônico de Trichoderma spp. associados a dsRNA contra Colletotrichum guaranicola (Albuq.). 2010. 68f. Tese (Doutorado em Biotecnologia) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus, 2010. http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/4491 por Acesso Aberto application/pdf Universidade Federal do Amazonas Institutos de Ciências Biológicas Brasil UFAM Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia |
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TEDE - Universidade Federal do Amazonas |
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O guaran´a (Paulinia cupana) ´e uma das mais importantes culturas do Estado do Amazonas.
Comercialmente, sua utilizac¸ ˜ao ´e maior nos refrigerantes gaseificados, no entanto, a
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A principal doenc¸a que afeta a cultura do guaran´a ´e a antracnose, sendo seu
agente etiol´ogico o fitopat´ogeno Colletotrichum guaranicola. A principal forma de controle
da antracnose ´e o emprego de fungicidas qu´ımicos, por´em, em algumas regi˜oes, que adquiriram
o reconhecimento de cultura orgˆanica, esta medida de controle n˜ao se adequa `as necessidades
da produc¸ ˜ao. As esp´ecies do gˆenero Trichoderma, s˜ao antagonistas utilizadas eficazmente
no controle biol´ogico de algumas esp´ecies fitopatogˆenicas, incluindo o gˆenero Colletotrichum.
A presenc¸a de dsRNAs ´e frequente em fungos, sendo relatada na literatura muitas pesquisas
associando-os com v´arios aspectos nestes hospedeiros: fen´otipos hipovirulentos, alterac¸ ˜oes
morfol´ogicas, o fen´otipo “killer” em leveduras, ou ainda, a nenhuma alterac¸ ˜ao nestes microrganismos.
Esta pesquisa teve por objetivos investigar a presenc¸a e influˆencia de dsRNA sobre o
potencial antagˆonico de Trichoderma spp. contra C. guaranicola. Foram analisados 100 isolados
de Trichoderma spp., sendo que apenas um apresentou dsRNA. A esp´ecie foi determinada
por sequenciamento da regi˜ao ITS do rDNA e seus aspectos micromorfol´ogicos (microscopia
´optica e eletrˆonica de varredura) como Trichoderma asperellum. Procedeu-se a purificac¸ ˜ao
deste material por meio de cromatografia em coluna de celulose e a digest˜ao com nucleases
(DNAse I e nuclease S1). Para analisar a poss´ıvel interferˆencia destas part´ıculas no potencial
antagˆonico dos isolados de Trichoderma, eliminou-se o dsRNA do isolado infectado com a
substˆancia desoxicolato de s´odio, adicionada ao meio BDA na concentrac¸ ˜ao de 200 mg/mL.
Testes de antagonismo in vitro (pelo m´etodo de pareamento em placa), revelaram diferenc¸a
entre as linhagens is´ogenas (com e sem dsRNA) contra o fitopat´ogeno. O teste in vivo, pelo
m´etodo de adic¸ ˜ao de esporos de antagonista e fitopat´ogenos em plantas de Mucuna aterrima,
n˜ao apresentou diferenc¸a estat´ıstica entre as li-nhagens. Morfologicamente houve alterac¸ ˜oes
entre os isolados com e sem dsRNA, sendo que os sem dsRNA, apresentaram maior crescimento
micelial e maior produc¸ ˜ao de esporos. Diante dos resultados obtidos concluiu-se que o
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