Tese

Desenvolvimento de ferramentas de detecção das proteínas VP4 e VP6 para imunodiagnósticos de rotavírus do Tipo A

Devido as crescentes taxas de morbidade e mortalidade causada por Rotavírus humanos, métodos de detecção têm sido empregados rotineiramente em estudos clínicos epidemiológicos. O diagnóstico das infecções por Rotavírus baseia-se na detecção das partículas, antígenos ou RNA virais a partir de materia...

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Autor principal: Galvão, Leidiane Amorim Soares
Outros Autores: http://lattes.cnpq.br/4102934680517945
Grau: Tese
Idioma: por
Publicado em: Universidade Federal do Amazonas 2016
Assuntos:
Doenças diarreicas
Epidemiologia de rotavírus
Proteína recombinante
Anticorpo policlonal
Citometria de fluxo
CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
Acesso em linha: http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/5365
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spelling oai:https:--tede.ufam.edu.br-handle-:tede-53652017-04-26T05:04:02Z Desenvolvimento de ferramentas de detecção das proteínas VP4 e VP6 para imunodiagnósticos de rotavírus do Tipo A Galvão, Leidiane Amorim Soares Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi http://lattes.cnpq.br/4102934680517945 http://lattes.cnpq.br/1887686774621627 Doenças diarreicas Epidemiologia de rotavírus Proteína recombinante Anticorpo policlonal Citometria de fluxo CIÊNCIAS BIOLÓGICAS Devido as crescentes taxas de morbidade e mortalidade causada por Rotavírus humanos, métodos de detecção têm sido empregados rotineiramente em estudos clínicos epidemiológicos. O diagnóstico das infecções por Rotavírus baseia-se na detecção das partículas, antígenos ou RNA virais a partir de material fecal. O objetivo deste estudo foi desenvolver ferramentas de detecção das proteínas VP4 e VP6 para imunodiagnósticos de Rotavírus do tipo A. IgG de coelho e camundongos anti-VP4 e anti-VP6 foram obtidos a partir de imunizações feitas com as proteínas recombinantes VP4 e VP6 de Rotavírus A (ambas construídas neste estudo) e testados através de citometria de fluxo e western blot contra o antígeno recombinante e o antígeno nativo. A região da proteína VP4 selecionada para a geração de IgG de camundongo e coelho anti-VP4 foi eficiente para o reconhecimento do antígeno nativo em sua forma desnaturada, como foi possível observar nos ensaios de western blot. As análises de citometria demonstraram que os mesmos anti-VP4 gerados não foram específicos o suficiente para serem utilizados em técnicas onde a proteína VP4 está em sua forma nativa. As regiões selecionadas para a produção da proteína VP6 foram eficientes para a geração de anticorpos anti-VP6 capazes de reconhecer a proteína nativa em sua forma desnaturada e não desnaturada. Futuros trabalhos terão como objetivo o aumento da especificidade dos anticorpos obtidos de modo a permitir sua aplicação em um maior número de imunoensaios. Due to rising rates of morbidity and mortality caused by human rotavirus, detection methods have been used routinely in clinical and epidemiological studies. The diagnosis of rotavirus infections is based on the detection of particles, antigens or viral RNA from the fecal material. This study aimed to develop the VP4 and VP6 protein detection tools for immunodiagnostic of Rotavirus group A. Rabbit and mice anti-VP4 and anti-VP6 IgGs were obtained from immunizations made with VP4 and VP6 recombinant proteins of Rotavirus A, both built in this study, and tested by flow cytometry and Western blot against the recombinant antigen and the native antigen. The region of the VP4 protein, selected for the generation of mice and rabbit anti-VP4 IgGs, was efficient to recognize native antigen in denatured form, as observed in western blot assays. The cytometry analysis demonstrated that generated anti-VP4 antibodies were not specific enough to be used in techniques where the VP4 protein is in its native form. Selected regions for production of VP6 protein have been efficient for the generation of anti-VP6 antibodies, able to recognize the native protein in its denatured and non-denatured form. Future studies will aim to increase the specificity of the antibodies obtained to allow their use in a greater number of immunoassays. CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico 2016-12-13T14:41:28Z 2014-08-26 Tese GALVÃO, Leidiane Amorim Soares. Desenvolvimento de ferramentas de detecção das proteínas VP4 e VP6 para imunodiagnósticos de rotavírus do Tipo A. 2014. 87 f. Tese (Doutorado em Biotecnologia) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus, 2014. http://tede.ufam.edu.br/handle/tede/5365 por Acesso Aberto application/pdf Universidade Federal do Amazonas Instituto de Ciências Biológicas Brasil UFAM Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
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