O avanço das tecnologias moleculares no campo científico, possibilitou o desenvolvimento de
diversas formas de acesso ao material genético dos organismos, de forma a ser possível
localizar, mapear, isolar, caracterizar e decodificar os genes alvo de um indivíduo particular
ou de um conjunto de indivíduos coexistentes em um ambiente específico. Estudos
metagenômicos são bastante promissores em diversas áreas da biotecnologia, como nas
descobertas de novas moléculas de interesse biotecnológico industrial, na investigação de
novos antibióticos e fármacos, na biorremediação de ambientes impactados com metais
tóxicos e na prospecção de enzimas diversas. O objetivo deste trabalho foi caracterizar
enzimaticamente uma enzima lipase previamente rastreada de uma Biblioteca Metagenômica
de Terra Preta de Índio. A sequência correspondente ao gene de lipase foi isolada da biblioteca
metagenômica, clonada e expressada em Pichia pastoris sob controle do promotor PGK. A
lipase recombinante foi caracterizada pela atividade de hidrólise de substratos lipídicos e
capacidade de síntese em solvente orgânico. Análises in silico da sequência proteica inferem a
identificação de uma lipase extracelular pertencente à / -
hidrolase e com função molecular para atividade lipásica. A enzima foi produzida
eficientemente em P. pastoris e a lipase recombinante apresentou atividade de 374,59 U/mL
hidrolisando p-nitrofenil palmitato, Vmax(ap.) 143,4 U/mL.min-1, Km(ap.) 1,4 mM e Kcat(ap.)
103,7 S-1. A enzima possuiu atividade máxima em pH 8,0, temperatura 90 ºC e se manteve
estável em altas temperaturas. A capacidade de síntese foi avaliada pela formação de laurato
de etila pela reação de esterificação do ácido láurico com etanol apresentando rendimento de
70% em 45 minutos de reação. A proteína recombinante se caracteriza como uma enzima
alcalina, termotolerante, ativada por cálcio, EDTA e detergentes.
|
