Apoptose em macrófagos induzida por nanocápsulas com núcleo lipídico (LNC) carregadas com diclofenaco

Barbosa, Aguyda Rayany Cavalcante; http://lattes.cnpq.br/9050517985594977

Dissertação

Apoptose em macrófagos induzida por nanocápsulas com núcleo lipídico (LNC) carregadas com diclofenaco

O Diclofenaco é uma droga anti-inflamatória não esteroide (AINE), utilizada no tratamento de afecções inflamatórias musculoesqueléticas, incluindo as doenças autoimunes como a Artrite Reumatoide (AR). Na sinovite crônica da AR os macrófagos exercem papel central na inflamação e a indução de apoptose...

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Autor principal:	Barbosa, Aguyda Rayany Cavalcante
Outros Autores:	http://lattes.cnpq.br/9050517985594977
Grau:	Dissertação
Idioma:	por
Publicado em:	Universidade Federal do Amazonas 2019
Assuntos:	Macrófagos Agentes antiinflamatórios Artrite reumatóide Apoptose CIÊNCIAS BIOLÓGICAS: IMUNOLOGIA Diclofenaco Nanocápsula Macrófago Inflamação
Acesso em linha:	https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7510

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spelling	oai:https:--tede.ufam.edu.br-handle-:tede-75102019-11-20T05:04:05Z Apoptose em macrófagos induzida por nanocápsulas com núcleo lipídico (LNC) carregadas com diclofenaco Apoptosis in macrophages induced by diclofenac-loaded lipid core nanocapsules (LNC) Barbosa, Aguyda Rayany Cavalcante Lopes, Antonio Luiz Ribeiro Boechat http://lattes.cnpq.br/9050517985594977 http://lattes.cnpq.br/3558832059770794 Lima, Emerson Silva http://lattes.cnpq.br/1324552190537148 Pontillo, Alessandra http://lattes.cnpq.br/5264956586383796 Macrófagos Agentes antiinflamatórios Artrite reumatóide Apoptose CIÊNCIAS BIOLÓGICAS: IMUNOLOGIA Diclofenaco Nanocápsula Macrófago Inflamação O Diclofenaco é uma droga anti-inflamatória não esteroide (AINE), utilizada no tratamento de afecções inflamatórias musculoesqueléticas, incluindo as doenças autoimunes como a Artrite Reumatoide (AR). Na sinovite crônica da AR os macrófagos exercem papel central na inflamação e a indução de apoptose destas células pode vir a representar um papel central no tratamento. Neste trabalho, utilizou-se de uma formulação de diclofenaco carregada em nanocápsulas de núcleo lipídico (LNC-DIC), avaliando-se o papel desta formulação na indução de apoptose em macrófagos. A LNC foi formada a partir de um núcleo organogel, revestido com uma parede polimérica poly(e- caprolactona) e estabilizada com polyssorbato 80, obtendo diâmetro D[4,3] de 243nm para DIC e 319nm para LNC-DIC. Dessa forma foram utilizadas as formulações Diclofenaco (DIC), LNC-DIC e apenas LNC em macrófagos humanos (THP-1) e Murinos (J774). A IC50% para toxicidade em macrófagos para as formulações foi 646μM para DIC e 144,5μM para LNC-DIC em THP-1 e 251,7μM para DIC e 24,35μM para LNC-DIC em J774. A formulação LNC-DIC reduziu acentuadamente o potencial de membrana mitocondrial em relação a DIC (-44,65±3,36 e 21,79±2,19, p<0,0001, respectivamente) em THP-1, além de J774 (-5,65±0,88 e -26,59±7,21, p<0,0001). Também houve maior produção de ROS intracelular para LNC-DIC em relação a DIC na linhagem THP-1 (27,24±0,90 e 36,88±2,49, p=0,0002). A formulação LNC-DIC aumentou o percentual de células com caspase-3 ativa comparada à DIC (53,08±6,23 e 81,70±9,09, p=0,0007) e a atividade de caspase-3 nas concentrações estudadas. Além disso, LNC-DIC induziu maior percentual de células Anexina V+ comparada a DIC (6,26±0,34 e 12,68±0,22, p=0,0001). Quando avaliado o índice de dano ao DNA pelo ensaio cometa, não houve diferença entre as formulações testadas DIC e LNC-DIC (44,24±2,65 e 53,33±4,16, p=0,586). Tomados em conjunto, esses resultados demonstram que a formulação nanoencapsulada LNC-DIC tem ação indutora de apoptose, de forma independente do dano ao DNA, possivelmente relacionada a produção de ROS intracelular e/ou estresse do retículo endoplasmático, abrindo assim a possibilidade de um tratamento eficaz e barato para a AR, através do uso de Nanocápsulas de Núcleo Lipídico carregado com Diclofenaco. Diclofenac is a nonsteroidal anti-inflammatory drug, used to treat inflammatory muscle skeletal diseases, including the autoimmune diseases as Rheumatoid Arthritis (RA). In chronic synovitis of Rheumatoid Arthritis the macrophages play a central role in inflammation and the induction of apoptosis in those cells can represent a central paper in the treatment. For this work was used a formula of Diclofenac carried in nanocapsules of lipid core (LNC-DIC), validating the paper of this formula in apoptosis induction in macrophages. The LNC was formed parting from a organogel core, coated with a polymeric poly (e-caprolactona) wall and stabilized with Polyssorbato 80, obtaining a diameter D [4,3] of 243nm for DIC and 319nm for LNC-DIC. By that way were used the formulas Diclofenac (DIC), LNC-DIC and only LNC in human macrophages (THP-1) and murines (J774). The IC50% for toxicity in macrophages for the formulations was 646μM for DIC, 144,5μM for LNC-DIC in THP-1, 251,7μM for DIC and 24,35μM for LNC-DIC in J774. The formula LNC-DIC reduced strongly the mitochondrial membrane potential related to DIC (-44,65±3,36 e 21,79±2,19, p<0,0001, respectively) in THP-1, besides the J774 (-5,65±0,88 e -26,59±7,21, p<0,0001).There was also a ROS intracellular bigger production when compared with DIC in THP-1 lineage (27,24±0,90 e 36,88±2,49, p=0,0002). The LNC-DIC formulation increased the percentage of cells with activated caspasa 3 when compared with DIC (53,08±6,23 e 81,70±9,09, p=0,0007) and the caspasa 3 activity in the studied concentration. Besides this, LNC-DIC induced higher percentage of Annexin V+ cells compared to DIC (6,26±0,34 e 12,68±0,22, p=0,0001). When was validated the DNA damage index using comet test, there was not any difference between the tested DIC and LNC-DIC (44,24±2,65 e 53,33±4,16, p=0,586). Taking together, those results show that nanoencapsulated formulation LNC-DIC has an apoptosis inductor action, independent of DNA damage. Possibly related to intracellular ROS production and endoplasmic reticule stress, opening the possibilities for a functional and ship treatment for RA, through the use of nanocapsules of lipid core carried with Diclofenac. FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas 2019-11-19T20:57:43Z 2016-10-07 Dissertação BARBOSA, Aguyda Rayany Cavalcante. Apoptose em macrófagos induzida por nanocápsulas com núcleo lipídico (LNC) carregadas com diclofenaco. 2016. 61 f. Dissertação (Mestrado em Imunologia Básica e Aplicada) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus, 2016. https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7510 por Acesso Aberto image/jpeg application/pdf Universidade Federal do Amazonas Instituto de Ciências Biológicas Brasil UFAM Programa de Pós-graduação em Imunologia Básica e Aplicada
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