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Dissertação
Avaliação da reação em cadeia da polimerase quantitativa na detecção de Mycobacterium leprae em casos de hanseníase de difícil diagnóstico
A hanseníase é doença infecto-contagiosa causada pelo Mycobacterium leprae (M. leprae) que afeta principalmente a pele e nervos periféricos e pode causar incapacidades físicas as quais evoluem, potencialmente, para deformidades físicas permanentes. O paciente hanseniano pode ser classificado como...
Autor principal: | Lima, Maria Gláucia Silva de |
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Outros Autores: | http://lattes.cnpq.br/9623092249527057 |
Grau: | Dissertação |
Idioma: | por |
Publicado em: |
Universidade Federal do Amazonas
2020
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Assuntos: | |
Acesso em linha: |
https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7951 |
Resumo: |
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A hanseníase é doença infecto-contagiosa causada pelo Mycobacterium leprae (M.
leprae) que afeta principalmente a pele e nervos periféricos e pode causar
incapacidades físicas as quais evoluem, potencialmente, para deformidades físicas
permanentes. O paciente hanseniano pode ser classificado como paucibacilar e
multibacilar, sendo as formas paucibacilares de difícil diagnóstico. Novos métodos
moleculares de alta sensibilidade e especificidade como PCR em Tempo Real
qPCR, tem contribuído para diagnóstico da hanseníase, principalmente nos casos
de difícil diagnóstico. Este estudo foi desenvolvido na Fundação de Dermatologia
Tropical e Venereologia Alfredo da Matta, Manaus – Amazonas, no período de
março de 2014 a agosto de 2015, e teve o intuito de validar a técnica de qPCR na
detecção de M. leprae em biópsias cutâneas de pacientes com suspeita clínica de
hanseníase e submetidos a exame histopatológico. As amplificações por qPCR a
partir de uma sequência específica do gene 16S de M. leprae foram realizadas em
180 amostras, das quais, 82 eram biópsias frescas e 98 biópsias parafinadas. Das
biópsias frescas, foram analisadas 65 amostras, entre as quais estão 9 amostras de
pacientes com outras dermatoses, 12 amostras clinicamente inconclusivas e 38
amostras de pacientes com hanseníase. Destes, 68,5% (26/38) foram positivos no
teste molecular para a hanseníase e 33,3% (3/9) foram positivas para outras
dermatoses. A sensibilidade foi de 68,5%, especificidade de 66,70%, com valor
preditivo positivo de 89,7% e valor preditivo negativo de 33,3%. Entre as biópsias
parafinadas, foram analisadas somente 61 amostras dos pacientes com hanseníase,
as quais 73,8% foram positivas. Nestas amostras, o teste molecular apresentou
sensibilidade de 73,8%. Além disso, o número de genomas foi estimado nos dois
grupos de biópsias e variou de 8,53 (em uma biópsia parafinada) a 2.060.230 (em
uma biópsia fresca). Os dados sugerem claramente que o qPCR confirmam a
diferença entre pacientes MB e PB tanto em biópsias frescas quanto em biópsias
parafinadas sendo que as quantidades de genomas percentualmente e
quantitativamente foi maior em pacientes MB no grupo de amostras frescas quando
comparado ao grupo de amostras parafinadas. Curiosamente, os dados
quantitativos nas amostras de pacientes PB embora apresentem menor número de
genomas, tem também um percentual maior de positividade. A despeito de ajustes
necessários para melhorar a eficiência da reação, os resultados nos mostram que o
teste pode ser útil, em especial nos casos inconclusivos e de difícil diagnóstico,
como nas formas paucibacilares quando o número de genomas for alto (maior que
50) que diminui o risco de falsos positivos. |