Na região norte, onde há o maior consumo de pescado, o tambaqui (Colossoma
macropomum) é o peixe mais consumido. Para possibilitar o aumento da produção do
tambaqui, é necessário compreensão sobre a fisiologia, ecologia, dentre outros
conhecimentos, para uma otimização e padronização de tecnologias a serem
aplicadas na produção desse peixe. Recentemente, o cDNA do hormônio de
crescimento de tambaqui foi construído por síntese química e expresso em P. pastoris
sob o controle do promotor pAOX1 dessa levedura. Considerando a toxicidade do
indutor deste promotor, este trabalho tem como principal objetivo a expressão
heteróloga intracelular do hormônio de crescimento de tambaqui (rtGH) na levedura
Pichia pastoris, utilizando um promotor constitutivo, o pPGK1. Foram construídos dois
vetores para expressão de rtGH, sendo que esses vetores foram linearizados e
integrados no genoma de P. pastoris linhagem M12 (auxotrófica para o aminoácido
leucina). Os clones transformantes foram selecionados inicialmente no meio seletivo
MD seguido de uma segunda seleção por crescimento em meio MD com o antibiótico
G418. Para confirmação das colônias transformantes, foi realizado identificação do
gene rtGH por meio de PCR, enquanto a confirmação da expressão intracelular da
proteína foi realizada por imunodot e SDS-PAGE/Western Blotting. Como a expressão
do tGH ocorreu em níveis baixos, esforços deverão ser realizados no sentido de se
identificar a razão da baixa produção, para que se possa obter a expressão do
hormônio em níveis em que se possa utilizar a levedura recombinante para
suplementação de ração para peixes.
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