Expressão heteróloga da proteína FEM de abelha Melipona interrupta (Hymenoptera, Apidae) em bactéria Escherichia coli

Mendes, Filipe de Souza; http://lattes.cnpq.br/9695502438927744

Dissertação

Expressão heteróloga da proteína FEM de abelha Melipona interrupta (Hymenoptera, Apidae) em bactéria Escherichia coli

Em todo planeta é notória a queda populacional das abelhas, o que tem levado cientistas do mundo inteiro a encontrar meios que auxiliem a preservação destes animais. A redução populacional tem efeito extremamente negativo para esses insetos devido à diminuição dos alelos de genes de determinação de...

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Autor principal:	Mendes, Filipe de Souza
Outros Autores:	http://lattes.cnpq.br/9695502438927744
Grau:	Dissertação
Idioma:	por
Publicado em:	Universidade Federal do Amazonas 2021
Assuntos:	Abelhas - Reprodução Abelhas - Criação CIENCIAS BIOLOGICAS: BIOQUIMICA: BIOLOGIA MOLECULAR Feminizer Determinação de sexo Determinação de casta Melipona interrupta Expressão heteróloga
Acesso em linha:	https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/8537

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Por isso estudos que busquem a compreensão do papel destes genes podem vir a ajudar na preservação desses insetos. O gene fem desempenha importante papel da determinação de sexo e castas de abelhas. A contribuição do gene fem para estes processos em Mellipona interrupta, uma abelha nativa da região amazônica, tem sido investigada por métodos de trancriptômica. Para contribuir aos resultados e hipóteses de outros autores sobre a participação desse gene na determinação de sexo e casta de M. interrupta, este trabalho objetivou em expressar, purificar e renaturar a proteína rMiFEM. O gene fem sintético foi clonado no vetor de expressão pGS-21a e expresso em diferentes linhagens de Escherichia coli, sendo que os melhores resultados foram obtidos na linhagem Rosetta (DE3). Os clones expressaram uma proteína de 50 kDa (rMiFEM) na forma de corpúsculo de inclusão seguido de renaturação in vitro utilizando três diferentes protocolos. Destes, o que proporcionou melhores resultados foi o recomendado para renaturação de Proteínas SR. Ao se analisar a sequência peptídica da proteína MiFEM com ferramentas de bioinformática, identificou-se um domínio de ligação ao RNA que ainda não havia sido descrito para essa proteína, bem como duas regiões ricas em arginina e serina (domínios RS que já haviam sidos descritos anteriormente) e vários possíveis sítios de fosforilação. Utilizando protocolo de enriquecimento de Proteínas SR revelou-se um padrão diferente nas proteínas de machos, operarias e rainhas, indicando que diferentes Proteínas SR são expressas diferencialmente entre sexos e castas. Embora não tenha sido possível verificar a proteína Fem no extrato enriquecido, hipotetiza-se que Fem de M. interrupta foi precipitada pois apesar de não ser uma SR-proteína ela contém os domínios necessários para a precipitação. A proteína rMiFEM será posteriormente utilizada para produção de anticorpos específicos anti-Fem, o que auxiliará na compreensão da participação da proteína Fem na determinação de sexos e castas em M. interrupta. In all planet, the bees' population has fallen, which has led scientists from all over the world to find ways to help preserve these animals. Population reduction has an extremely negative effect on these insects due to decreased alleles of sex determination genes. Therefore studies that seek to understand the role of these genes may help to preserve these insects. The fem gene plays an important role in determining sex and bees castes. The contribution of the fem gene to these processes in Mellipona interrupta, a bee native to the Amazon region, has been investigated by transcriptomic methods. To contribute to the results and hypotheses of other authors on the participation of this gene in sex and caste determination of M.interrupta. This work aimed to express, purify and renature the rMiFEM protein. The synthetic Fem gene was cloned into the expression vector pGS-21a and expressed in different strains of Escherichia coli, with the best results obtained in the Rosetta (DE3) strain. The clones expressed a 50 kDa protein (rMiFEM) in inclusion corpuscle form followed by in vitro renaturation using three different protocols. Of these, the one that provided the best results was a recommended for renaturation of SR-proteins. When analyzing the peptide sequence of the MiFEM protein with bioinformatics tools, an RNA binding domain was identified that had not yet been described for this protein, as well as two regions rich in arginine and serine (RS Domains that had already been described previously) and several possible phosphorylation sites. Using an SR-protein enrichment protocol a different pattern was obtained in the proteins of males, workers and queens, indicating that different SR-proteins are differentially expressed between sexes and castes. Although it has not been possible to detect Fem protein in the SR-protein enriched extract, it does not exclude the hypothesis that Fem of M. interrupta is in the precipitate, although it is not an SR-protein, but having the necessary domains for precipitation. The rMiFEM protein will subsequently be used to produce specific anti-Fem antibodies, which will help in understanding the participation of Fem protein in the determination of sexes and casts in M. interrupta. CNPQ - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico FAPEAM - Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado do Amazonas 2021-11-16T20:27:30Z 2018-11-29 Dissertação MENDES, Filipe de Souza. Expressão heteróloga da proteína FEM de abelha Melipona interrupta (Hymenoptera, Apidae) em bactéria Escherichia coli. 2018. 67 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus (AM), 2018. https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/8537 por Acesso Aberto http://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0/ application/pdf Universidade Federal do Amazonas Instituto de Ciências Biológicas Brasil UFAM Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
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Expressão heteróloga da proteína FEM de abelha Melipona interrupta (Hymenoptera, Apidae) em bactéria Escherichia coli

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