Expressão e purificação da proteína Corismato Sintaxe de Plasmodium falciparum a partir da otimização e síntese do gene para sistema procariótico.
Dissertação apresentada ao Programa de Pós- Graduação: Mestrado em Biologia Experimental (PGBIOEXP) da Fundação Universidade Federal de Rondônia (UNIR) como requisito final para a obtenção do título de Mestre em Biologia Experimental. Orientador: Prof. Dr. Eduardo Rezende Honda.
| Autor principal: | Leandro, Teodoro |
|---|---|
| Outros Autores: | Honda, Eduardo Rezende |
| Grau: | Outros |
| Publicado em: |
2016
|
| Assuntos: | |
| Acesso em linha: |
http://www.ri.unir.br/jspui/handle/123456789/495 |
| id |
oai:localhost:123456789-495 |
|---|---|
| recordtype |
dspace |
| spelling |
oai:localhost:123456789-4952018-10-29T19:10:58Z Expressão e purificação da proteína Corismato Sintaxe de Plasmodium falciparum a partir da otimização e síntese do gene para sistema procariótico. Leandro, Teodoro Honda, Eduardo Rezende Biologia molecular Bioinformática Síntese gênica Expressão de proteínas Procariotos Dissertação apresentada ao Programa de Pós- Graduação: Mestrado em Biologia Experimental (PGBIOEXP) da Fundação Universidade Federal de Rondônia (UNIR) como requisito final para a obtenção do título de Mestre em Biologia Experimental. Orientador: Prof. Dr. Eduardo Rezende Honda. A malária é uma doença de grande importância epidemiológica em termos de morbidade e mortalidade no mundo. O índice de resistência às drogas antimaláricas vem aumentando gradativamente ao longo das últimas décadas. A descrição de vias metabólicas exclusivas de Plasmodium está abrindo perspectivas para desenvolvimento de novas drogas contra alvos moleculares bem definidos. A via do chiquimato é uma dessas vias metabólicas, e nesta está presente a enzima corismato sintase (CS) que catalisa a transformação de 5- enolpiruvil chiquimato 3-fosfato em corismato, último precursor comum na biossíntese de compostos aromáticos, presentes em bactérias, fungos, plantas, protozoários apicomplexa e ausente em mamíferos. A síntese e otimização do gene da proteína (PfCS) foi necessária para expressão em sistema procarioto. O produto gênico liofilizado foi inserido em vetor de clonagem PUC57 e vetor de expressão pGS21a. O plasmídeo foi transformado em células competentes TOP 10 F’, em seguida realizou-se miniprep e confirmação com enzimas de restrição Ncol e SalI. A retransformação foi realizada em células competentes BL 21 DE3 pLys e a indução foi com IPTG. A expressão foi confirmada por gel de SDSPAGE. A etapa de purificação foi realizada com Kit Qiagen 6x Histidina em coluna de Ni-NTA. A expressão foi obtida na forma de proteína recombinante de fusão com histidina, assumindo a forma de corpúsculos de inclusão, que foram desnaturadas com uréia 8M. Após purificação por coluna de afinidade obtivemos um nível aceitável de pureza. Estamos trabalhando para expressar essa proteína na forma solúvel e também em protocolos de renovelamento. Estudos in vitro englobando teste da atividade e inibição enzimática utilizando extratos vegetais encontrados na região Amazônica poderão identificar novos potenciais de fármacos para o tratamento da malária, inicialmente P. falciparum. 2016-03-30T18:37:01Z 2016-03-30T18:37:01Z 2010 Other LEANDRO, Teodoro. Expressão e purificação da proteína Corismato Sintaxe de Plasmodium falciparum a partir da otimização e síntese do gene para sistema procariótico. 2010. 76 f. Dissertação (Mestrado) - Programa de Pós-Graduação em Biologia Experimental, Fundação Universidade Federal de Rondônia, Porto Velho, 2010. http://www.ri.unir.br/jspui/handle/123456789/495 |
| institution |
Repositório Institucional - Universidade Federal de Rondônia |
| collection |
RepositorioUNIR |
| topic |
Biologia molecular Bioinformática Síntese gênica Expressão de proteínas Procariotos |
| spellingShingle |
Biologia molecular Bioinformática Síntese gênica Expressão de proteínas Procariotos Leandro, Teodoro Expressão e purificação da proteína Corismato Sintaxe de Plasmodium falciparum a partir da otimização e síntese do gene para sistema procariótico. |
| topic_facet |
Biologia molecular Bioinformática Síntese gênica Expressão de proteínas Procariotos |
| description |
Dissertação apresentada ao Programa de Pós- Graduação: Mestrado em Biologia Experimental (PGBIOEXP) da Fundação Universidade Federal de Rondônia (UNIR) como requisito final para a obtenção do título de Mestre em Biologia Experimental. Orientador: Prof. Dr. Eduardo Rezende Honda. |
| format |
Outros |
| author |
Leandro, Teodoro |
| author2 |
Honda, Eduardo Rezende |
| author2Str |
Honda, Eduardo Rezende |
| title |
Expressão e purificação da proteína Corismato Sintaxe de Plasmodium falciparum a partir da otimização e síntese do gene para sistema procariótico. |
| title_short |
Expressão e purificação da proteína Corismato Sintaxe de Plasmodium falciparum a partir da otimização e síntese do gene para sistema procariótico. |
| title_full |
Expressão e purificação da proteína Corismato Sintaxe de Plasmodium falciparum a partir da otimização e síntese do gene para sistema procariótico. |
| title_fullStr |
Expressão e purificação da proteína Corismato Sintaxe de Plasmodium falciparum a partir da otimização e síntese do gene para sistema procariótico. |
| title_full_unstemmed |
Expressão e purificação da proteína Corismato Sintaxe de Plasmodium falciparum a partir da otimização e síntese do gene para sistema procariótico. |
| title_sort |
expressão e purificação da proteína corismato sintaxe de plasmodium falciparum a partir da otimização e síntese do gene para sistema procariótico. |
| publishDate |
2016 |
| url |
http://www.ri.unir.br/jspui/handle/123456789/495 |
| _version_ |
1787136408114167808 |
| score |
11.755432 |