Artigo

Discriminação alélica do fator V da coagulação por PCR em tempo real: diagnóstico simples e preciso

Among cardiovascular diseases, venous thrombosis is important due to the association between acquired and genetic risks factors. Hereditary resistance to activated protein C has been identified as the main cause of venous thrombosis, and is frequently associated to the factor V Leiden mutation (G169...

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Autor principal: OLIVEIRA FILHO, Aldemir Branco de
Outros Autores: CAMPOS, Júlia Furtado, LIMA, Magaly do Bom Parto Lopes Vieira, MELO, Fárida Coeli de Barros Correia, NEVES, Washington Batista das, MELO, Raul Antônio Morais, LEMOS, José Alexandre Rodrigues de
Grau: Artigo
Idioma: por
Publicado em: 2013
Assuntos:
Trombose venosa
Reação em cadeia da polimerase
Fator V Leiden
Acesso em linha: http://repositorio.ufpa.br/jspui/handle/2011/4295
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spelling ir-2011-42952018-01-25T14:43:43Z Discriminação alélica do fator V da coagulação por PCR em tempo real: diagnóstico simples e preciso Allelic discrimination of coagulation factor V by real time PCR: a simple and accurate diagnosis OLIVEIRA FILHO, Aldemir Branco de CAMPOS, Júlia Furtado LIMA, Magaly do Bom Parto Lopes Vieira MELO, Fárida Coeli de Barros Correia NEVES, Washington Batista das MELO, Raul Antônio Morais LEMOS, José Alexandre Rodrigues de Trombose venosa Reação em cadeia da polimerase Fator V Leiden Among cardiovascular diseases, venous thrombosis is important due to the association between acquired and genetic risks factors. Hereditary resistance to activated protein C has been identified as the main cause of venous thrombosis, and is frequently associated to the factor V Leiden mutation (G1694A). In homozygotic individuals, the risk of venous thrombosis is 50 to 100 times higher that in normal patients, while in heterozygotic patients the risk is 5 to 10 times higher. Based on the need of evaluation and follow up of patients with venous thrombosis and prevention in their respective families, a simple method of allelic discrimination of coagulation V factor was developed using real time PCR. Sixty-seven patients with a history of venous thrombosis and 51 individuals without venous thrombosis were selected for this study. First, identification of the factor V allele was achieved through conventional PCR followed by enzymatic digestion (Mnl). Subsequently, diagnosis was attained by real time PCR. Both the methods investigated the G1691A polymorphism using VIC and FAM fluorophores to mark nucleotides G and A, respectively. By PCR-RFLP, 95 individuals were diagnosed as normal homozygotes, 21 as heterozygotes and 2 as homozygotic factor V Leiden individuals. The same results were obtained using real time PCR. Maximum similarity between the results of real time PCR and PCR-RFLP indicates high precision of the new method for allelic identification and visualization of factor V Leiden. Dentre as doenças cardiovasculares, a trombose venosa (TV) destaca-se pela associação entre fatores de riscos adquiridos e fatores genéticos. A resistência hereditária à proteína C ativada tem sido identificada como a principal causa dos casos de trombose venosa, sendo frequentemente associada à mutação fator V Leiden (G1694A). Em indivíduos homozigotos, o risco de trombose venosa é 50 a 100 vezes maior que em pacientes homozigotos normais, enquanto em pacientes heterozigotos o risco é de 5 a 10 vezes. Baseado na necessidade de avaliação e acompanhamento de pacientes com casos de trombose venosa e prevenção de seus respectivos familiares, foi desenvolvido um método simples de discriminação alélica do fator V da coagulação utilizando PCR em tempo real. Foram selecionados 67 pacientes com histórico de TV e 51 indivíduos sem histórico de TV. Primeiramente, a discriminação alélica do fator V foi realizada através de PCR convencional seguida de digestão enzimática (Mnl). Posteriormente, o diagnóstico foi realizado por PCR em tempo real. Ambos os métodos foram baseados no polimorfismo G1691A, sendo no segundo utilizado fluoróforos VIC e FAM para marcar os nucleotídeos G e A, respectivamente. A técnica de PCR-RFLP foi utilizada para diagnosticar 95 indivíduos homozigotos normais, 21 heterozigotos e 2 homozigotos FVL. Utilizando PCR em tempo real foram obtidos os mesmos resultados. A máxima similaridade entre os resultados obtidos por PCR em tempo real e PCR-RFLP indicou precisão significativa do novo método de discriminação e visualização alélica do fator V. 2013-09-27T16:03:57Z 2013-09-27T16:03:57Z 2009-03 Artigo de Periódico OLIVEIRA FILHO, Aldemir B., et al. Discriminação alélica do fator V da coagulação por PCR em tempo real: diagnóstico simples e preciso. Revista Brasileira de Hematologia e Hemoterapia, São Paulo, v. 31, n. 1, p. 25-28, jan./fev. 2009. Epub: 06 mar. 2009. Disponível em: <http://www.scielo.br/pdf/rbhh/v31n1/aop0509.pdf>. Acesso em: 27 set. 2013. <http://dx.doi.org/10.1590/S1516-84842009005000005>. 1806-0870 1516-8484 http://repositorio.ufpa.br/jspui/handle/2011/4295 por Acesso Aberto application/pdf
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