Resumo: A S?ndrome Pulmonar por Hantav?rus ? uma zoonose emergente, muitas vezes fatal
causada por hantav?rus (fam?lia Bunyaviridae). A transmiss?o para humanos ocorre
atrav?s do contato com excreta de roedores silvestres infectados. No Brasil, o
diagn?stico para hantav?rus ? baseado em t?cnicas imunol?gicas, enquanto que RTPCR
? utilizado como suporte laboratorial. O RT-qPCR tem sido utilizado no
diagn?stico molecular de diversos agentes etiol?gicos, principalmente devido ?
gera??o r?pida de resultados, junto com elevada sensibilidade e especificidade. No
entanto, n?o h? nenhum ensaio de RT-qPCR desenhado para detectar os hantav?rus
circulantes na Amaz?nia brasileira. Portanto, este estudo teve como objetivo o
desenvolvimento de um ensaio de RT-qPCR controlado internamente para detectar
esses hantav?rus. Um conjunto de iniciadores e sonda foi desenhado a partir de uma
regi?o do gene N consenso, utilizando sequ?ncias dos hantav?rus VLN, VANAJ,
VCAS e VRIOM. Esta mesma regi?o tamb?m foi clonada em plasm?deos e transcrita
in vitro para RNA, o qual foi dilu?do em padr?es de concentra??o conhecida. O RNA
de bacteri?fago MS2 foi adiconado em todas as amostras antes da extra??o e foi
detectado em conjunto com hantav?rus como um controle ex?geno numa reac??o
duplex. Para avaliar os valores de sensibilidade, especificidade e acur?cia do
protocolo, foram testadas 127 amostras (de sangue ou soro), dividindo-se em tr?s
grupos: hantav?rus positivo, hantav?rus negativas e positivas para outros agentes
patog?nicos. Os resultados foram comparados aos obtidos por semi-nested RTPCR.
A efici?ncia de RT-qPCR ficou em cerca de 100% e o limite de detec??o foi de
0,9 c?pias / mL de RNA. N?o houve amplifica??o de ambos, as amostras negativas
ou as amostras positivas de outros agentes patog?nicos. O RT-qPCR foi mais
sens?vel do que a semi-nested RT-PCR, sendo capaz de detectar tr?s amostras n?o
detectadas pelo semi-nested RT-PCR. A sensibilidade, especificidade e acur?cia
RT-qPCR valores foram de 92,5%, 100% e 97,63%, respectivamente. Assim, o
ensaio de RT-qPCR desenvolvido foi espec?fico, sens?vel e capaz de gerar
resultados em duas horas, o que o torna um poderoso instrumento em aplica??es de
diagn?stico, vigil?ncia e investiga??o de hantavirose na regi?o da Amaz?nia
brasileira e, possivelmente, para outros hantav?rus
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