No Brasil, os peixes Brachyplatystoma filamentosum - filhote, Brachyplatystoma rousseauxi – dourada e Brachyplatystoma vaillantii – piramutaba, são importantes recursos pesqueiros, cujos filés vêm sendo substituídos por peixes de menor valor econômico, caracterizando fraude comercial. Portanto, foi desenvolvido protocolo, baseado em PCR multiplex do COI mitocondrial, para identificar as espécies pelo padrão de bandeamento e avaliar a autenticidade dos produtos processados. Desta forma, o presente trabalho objetivou validar o protocolo multiplex desenvolvido para identificação e autenticação destes peixes processados. Foram coletadas 128 amostras de peixes rotulados como filhote (N = 6, 4 postas e 2 filés), dourada (N = 62, 21 postas e 41 filés) e piramutaba (N = 60, 5 postas e 55 filés). O DNA foi extraído e o protocolo multiplex utilizado, resultando em 85,94% dos produtos contendo a banda controle (~650 pb) e o fragmento espécie-específico de ~254 pb para a dourada, ~405 pb para a piramutaba e -466 pb para o filhote. Por outro lado, 14,06% (N = 18) das amostras não correspondiam à espécie descrita no rótulo, e a substituição foi observada apenas na dourada a qual foi trocada por piramutaba (N = 15) e Sciades proops (N = 3). A dourada possui maior valor agregado que a piramutaba e S. proops, portanto, sugerimos que as substituições são fraudulentas, visando o lucro das empresas em detrimento do consumidor. Diante destes resultados, conclui-se que a PCR multiplex é um protocolo eficiente, rápido, sensível e econômico, que pode ser utilizada para a autenticação de produtos processados.
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