Os venenos de serpentes são constituídos por compostos orgânicos e inorgânicos,
resultando em um produto biológico eficiente e de natureza complexa, que tem como
principais objetivos a imobilização, morte e a promoção da digestão inicial das presas.
Além disso, apresentam um enorme potencial para prospecção de moléculas com
aplicação farmacológica. Dentre os compostos orgânicos destacam-se as proteínas,
principalmente as proteases, pois apresentam capacidade em alterar o sistema
hemostático. As serinoproteases dos venenos de serpentes (SVSPs) pertencem à classe
de proteases que agem sobre diferentes fatores da cascata de coagulação. Uma das
classes de SVSPs é descrita como trombina-símile (SVTLEs) por mimetizar algumas
atividades da trombina, exibindo capacidade coagulante in vitro por intermédio da
degradação das cadeias α e/ou β do fibrinogênio. Os objetivos do trabalho foram (i)
caracterizar estruturalmente a BpirSP-39 isolada previamente do veneno de Bothrops
pirajai e (ii) isolar e caracterizar a primeira serinoprotease (SP) do veneno de B. brazili.
Estudos dessa magnitude justificam-se, pois podem trazer importantes informações
sobre a participação das proteínas durante o envenenamento, podendo auxiliar no
melhor conhecimento sobre os mecanismos de ações destas enzimas. As estruturas
primárias, bem como, os modelos tridimensionais de ambas SPs isoladas foram
elucidados. A BpirSP-39 possui 224 aminoácidos e apresenta elevada identidade com
outras SVSPs. A BbrzSP-32 foi obtida do veneno de B. brazili após duas etapas
cromatográficas (afinidade e fase reversa) e sua estrutura primária apresentou 240
resíduos de aminoácidos. Ambas as enzimas caracterizadas podem assumir a estrutura
da SP de Agkistrodon halys (PDB ID: 4E7N), proteína utilizada como modelo para a
modelagem molecular, sendo glicoproteínas monoméricas globulares com duas α-
hélices e dois barris formados por folhas-β. Com relação à BbrzSP-32, por intermédio
de eletroforese foi obtida a massa molecular relativa (36 kDa), sendo sua massa absoluta
confirmada por espectrometria de massa como 32.520 Da. A BbrzSP-32 possui
identidade de até 79,48% quando comparada a outras SVSPs e foi capaz de, em
modelos in vitro, degradar a cadeia α do fibrinogênio, sendo considerada uma SVTLE11
A. Possui atividade dose dependente no processo de degradação de redes de fibrina,
demonstrando maior especificidade por essa atividade quando comparada à sua ação
trombolítica. Apresenta atividade de proteólise sobre gelatina e substratos
cromogênicos, para serinoproteases e enzimas trombina-símile (S-2288 e S-2238,
respectivamente), além de possuir atividade coagulante sobre o plasma humano. As
atividades de proteólise sobre os substratos S-2288 e S-2238, bem como, coagulantes,
foram reduzidas por PMSF e benzamidina e, em menor proporção por EDTA. A
BbrzSP-32 apresenta relativa estabilidade frente a variações de pH e temperatura,
demonstrando maiores atividades entre 30 e 40 ºC e, em intervalo de pH 7,5 à 8,5. A
enzima não induz ou interfere na coagulação de plaquetas lavadas. Quando incubada
com os parasitos Trypanosoma cruzi e Leishmania infantum, nas formas epimastigota e
promastigota, respectivamente, e bactérias gram-positiva da espécie Staphylococcus
epidermidis, apresentou-se citotóxica sobre os microrganismos, além disso, foi capaz de
reduzir o biofilme formado pela espécie de bactéria. Ambas SPs apresentam potenciais
biotecnológicos.
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