As leishmanioses são um sério problema de saúde pública que afetam áreas de clima temperado e
tropical. Atualmente, há 1,3 milhões de casos e aproximadamente 20 mil mortes por ano, parte em
razão dos tratamentos que apresentam diversas inadequações, sérios efeitos colaterais e falha
terapêutica de até 65% sugerindo urgência na descoberta de terapias alternativas para o combate
dessa doença. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia e efeitos toxicológicos da associação
entre a Crotamina (CTA) de Crotalus durissus terrificus e fármacos clássicos empregados na
terapia da leishmaniose. Estudo preliminar realizado identificou a melhor combinação entre a CTA
e Glucantime® (GLU) ou Pentamidina (PEN) contra as formas promastigotas de L. amazonensis.
Doravante, as formulações com GLU avaliadas foram denominadas de G1 (GLU 300 μg μg/mL
+ CTA 100 μg/mL) e G2 (GLU 300 μg μg/mL + CTA 3,125 μg μg/mL) e com PEN denominadas
de P1 (PEN 0,05 μg μg/mL + CTA 100 μg μg/mL) e P2 (PEN 0,05 μg μg/mL + CTA 3,125 μg
μg/mL). In vitro, os tratamentos foram avaliados sobre a inibição do crescimento de promastigotas,
amastigotas, produção de Óxido Nítrico, citocinas e citotoxicidade dos tratamentos sobre células
de linhagem. Foram analisadas também a afinidade molecular e a caracterização molecular da
CTA e GLU ou PEN. In vivo, os grupos experimentais foram denominados G5 (GLU 300 mg.kg-
1 + CTA 5 mg.kg-1) e G6 (PEN 4 mg.kg-1 + CTA 5 mg.kg-1) e os tratamentos foram realizados por
oito dias alternados. Após 48h do fim do tratamento os animais foram mortos e as patas foram
retiradas na primeira articulação acima da lesão para pesagem. Em seguida, foi realizada a retirada
de sangue, tecido da pata, linfonodo, rins, fígado e baço para posteriores experimentos. O sangue
de cada animal foi centrifugado e o soro separado para análise bioquímica e imunológica. As
combinações G1, G2, P1 e P2 se mostraram mais eficazes contra promastigotas, ou igualmente
eficientes contra amastigotas e menos citotóxicas que os fármacos sozinhos. As formulações G1,
G2, P1 e P2 não alteraram as respostas celulares de NO, contudo, G1 e G2 estimularam TNF-α,
enquanto P1 e P2 estimularam IL-12. O Docking, a DM e SPR demonstraram afinidade molecular
entre CTA ao GLU e à PEN com um perfil concentração dependente. In vivo, os tratamentos
experimentais (grupos G5 e G6) mostraram-se mais eficazes que as fármacos sozinhos (grupos G3
e G4) na diminuição da carga parasitária da pata e linfonodo, contudo, não houve diminuição do
tamanho da lesão. Os animais não perderam massa corporal e, em conjunto com os dados das
análises bioquímicas, demonstra baixa toxicidade e adequada tolerabilidade ao tratamento. Os
grupos G5 e G6 exibiram prioritariamente um perfil Th1 com forte aumento da produção de IFN-
γ, TNF-α e IL-17a enquanto, em contrapartida, inibiram IL-10. A combinação de CTA aumentou
a eficácia do tratamento e diminuição da citotoxicidade in vitro do GLU e da PEN contra L.
amazonensis, modulou a resposta imune celular. A de CTA com ambos os fármacos mostrou ser
mais eficaz que os fármacos sozinhos na diminuição da carga parasitária sem demonstrar
toxicidade sistêmica. Essa abordagem de combinação farmacológica demonstrou ser promissora
para o tratamento experimental da leishmaniose cutânea. Como perspectivas futuras, far-se-á
necessário explicar os mecanismos envolvidos na inibição do parasito e diminuição da
citotoxicidade proporcionada pelos tratamentos experimentais.
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