Tese

Avaliação dos efeitos da associação entre a crotamina de Crotalus durissus terrificus e fármacos clássicos no tratamento da leishmaniose cutânea experimental

As leishmanioses são um sério problema de saúde pública que afetam áreas de clima temperado e tropical. Atualmente, há 1,3 milhões de casos e aproximadamente 20 mil mortes por ano, parte em razão dos tratamentos que apresentam diversas inadequações, sérios efeitos colaterais e falha terapêutica d...

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Autor principal: Silva, João Rafael Valentim
Outros Autores: http://lattes.cnpq.br/5360741595021004
Grau: Tese
Idioma: por
Publicado em: Universidade Federal do Amazonas 2018
Assuntos:
Leishmaniose Cutânea
Crotamina
Fármacos antileishmania
Terapia experimental
CIÊNCIAS BIOLÓGICAS
Acesso em linha: https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/6518
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spelling oai:https:--tede.ufam.edu.br-handle-:tede-65182020-02-14T05:03:48Z Avaliação dos efeitos da associação entre a crotamina de Crotalus durissus terrificus e fármacos clássicos no tratamento da leishmaniose cutânea experimental Silva, João Rafael Valentim Nicolete, Roberto http://lattes.cnpq.br/5360741595021004 http://lattes.cnpq.br/0447073555893530 Soares, Andreimar Martins Holanda, Rudson de Jesus Soares, Leidiane Amorin Leishmaniose Cutânea Crotamina Fármacos antileishmania Terapia experimental CIÊNCIAS BIOLÓGICAS As leishmanioses são um sério problema de saúde pública que afetam áreas de clima temperado e tropical. Atualmente, há 1,3 milhões de casos e aproximadamente 20 mil mortes por ano, parte em razão dos tratamentos que apresentam diversas inadequações, sérios efeitos colaterais e falha terapêutica de até 65% sugerindo urgência na descoberta de terapias alternativas para o combate dessa doença. O objetivo deste estudo foi avaliar a eficácia e efeitos toxicológicos da associação entre a Crotamina (CTA) de Crotalus durissus terrificus e fármacos clássicos empregados na terapia da leishmaniose. Estudo preliminar realizado identificou a melhor combinação entre a CTA e Glucantime® (GLU) ou Pentamidina (PEN) contra as formas promastigotas de L. amazonensis. Doravante, as formulações com GLU avaliadas foram denominadas de G1 (GLU 300 μg μg/mL + CTA 100 μg/mL) e G2 (GLU 300 μg μg/mL + CTA 3,125 μg μg/mL) e com PEN denominadas de P1 (PEN 0,05 μg μg/mL + CTA 100 μg μg/mL) e P2 (PEN 0,05 μg μg/mL + CTA 3,125 μg μg/mL). In vitro, os tratamentos foram avaliados sobre a inibição do crescimento de promastigotas, amastigotas, produção de Óxido Nítrico, citocinas e citotoxicidade dos tratamentos sobre células de linhagem. Foram analisadas também a afinidade molecular e a caracterização molecular da CTA e GLU ou PEN. In vivo, os grupos experimentais foram denominados G5 (GLU 300 mg.kg- 1 + CTA 5 mg.kg-1) e G6 (PEN 4 mg.kg-1 + CTA 5 mg.kg-1) e os tratamentos foram realizados por oito dias alternados. Após 48h do fim do tratamento os animais foram mortos e as patas foram retiradas na primeira articulação acima da lesão para pesagem. Em seguida, foi realizada a retirada de sangue, tecido da pata, linfonodo, rins, fígado e baço para posteriores experimentos. O sangue de cada animal foi centrifugado e o soro separado para análise bioquímica e imunológica. As combinações G1, G2, P1 e P2 se mostraram mais eficazes contra promastigotas, ou igualmente eficientes contra amastigotas e menos citotóxicas que os fármacos sozinhos. As formulações G1, G2, P1 e P2 não alteraram as respostas celulares de NO, contudo, G1 e G2 estimularam TNF-α, enquanto P1 e P2 estimularam IL-12. O Docking, a DM e SPR demonstraram afinidade molecular entre CTA ao GLU e à PEN com um perfil concentração dependente. In vivo, os tratamentos experimentais (grupos G5 e G6) mostraram-se mais eficazes que as fármacos sozinhos (grupos G3 e G4) na diminuição da carga parasitária da pata e linfonodo, contudo, não houve diminuição do tamanho da lesão. Os animais não perderam massa corporal e, em conjunto com os dados das análises bioquímicas, demonstra baixa toxicidade e adequada tolerabilidade ao tratamento. Os grupos G5 e G6 exibiram prioritariamente um perfil Th1 com forte aumento da produção de IFN- γ, TNF-α e IL-17a enquanto, em contrapartida, inibiram IL-10. A combinação de CTA aumentou a eficácia do tratamento e diminuição da citotoxicidade in vitro do GLU e da PEN contra L. amazonensis, modulou a resposta imune celular. A de CTA com ambos os fármacos mostrou ser mais eficaz que os fármacos sozinhos na diminuição da carga parasitária sem demonstrar toxicidade sistêmica. Essa abordagem de combinação farmacológica demonstrou ser promissora para o tratamento experimental da leishmaniose cutânea. Como perspectivas futuras, far-se-á necessário explicar os mecanismos envolvidos na inibição do parasito e diminuição da citotoxicidade proporcionada pelos tratamentos experimentais. Leishmaniasis is a serious public health problem affecting areas of temperate and tropical climate. Currently, there are 1.3 million cases and approximately 20 thousand deaths per year, partly due to the treatments that present several inadequacies, serious side effects and therapeutic failure of up to 65% suggesting urgency in the discovery of alternative therapies to combat this disease. The objective of this study was to evaluate the efficacy and toxicological effects of the association between crotalin (CTA) of Crotalus durissus terrificus and classical drugs used in the therapy of leishmaniasis. Preliminary study identified the best combination between CTA and Glucantime® (GLU) or Pentamidine (PEN) against the promastigotes of L. amazonensis. In the present study, the GLU formulations were characterized as G1 (GLU 300 μg / mL + CTA 100 μg / mL) and G2 (GLU 300 μg / mL + CTA 3.125 μg / mL) and PEN 0.05 μg / mL + CTA 100 μg / mL) and P2 (PEN 0.05 μg / mL + CTA 3.125 μg / mL). In vitro, the treatments were evaluated on inhibition of growth of promastigotes, amastigotes, production of nitric oxide, cytokines and cytotoxicity of treatments on lineage cells. Molecular affinity and molecular characterization of CTA and GLU or PEN were also analyzed. In vivo, the experimental groups were named G5 (GLU 300 mg.kg-1 + CTA 5 mg.kg-1) and G6 (PEN 4 mg.kg-1 + CTA 5 mg.kg-1) and treatments were performed for eight alternate days. After 48h of the end of treatment the animals were killed, and the paws were removed in the first joint above the lesion for weighing. Blood, paw, lymph node, kidneys, liver and spleen were then removed for further experiments. The blood from each animal was centrifuged and the serum separated for biochemical and immunological analysis. Combinations G1, G2, P1 and P2 have been shown to be more effective against promastigotes, or equally efficient against amastigotes and less cytotoxic than drugs alone. Formulations G1, G2, P1 and P2 did not alter the cellular responses of NO, however, G1 and G2 stimulated TNF-α, while P1 and P2 stimulated IL-12. Docking, DM and SPR demonstrated molecular affinity between CTA to GLU and PEN with a concentration-dependent profile. In vivo, experimental treatments (G5 and G6 groups) were shown to be more effective than the drugs alone (G3 and G4 groups) in reducing the parasitic load of the paw and lymph node, however, there was no decrease in lesion size. The animals did not lose body mass and, together with the biochemical analysis data, showed low toxicity and adequate treatment tolerability. Groups G5 and G6 primarily exhibited a Th1 profile with a marked increase in the production of IFN-γ, TNF-α and IL-17α while, on the other hand, they inhibited IL-10. The combination of CTA increased the efficacy of treatment and decreased in vitro cytotoxicity of GLU and PEN against L. amazonensis, modulated the cellular immune response. A of CTA with both drugs was shown to be more effective than the drugs alone in reducing the parasite burden without showing systemic toxicity. This pharmacological combination approach has been shown to be promising for the experimental treatment of cutaneous leishmaniasis. As future prospects, it will be necessary to explain the mechanisms involved in inhibiting the parasite and reducing the cytotoxicity provided by the experimental treatments. CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico Márcia, revisar se os campos com metadados estão ok. O npumero do autor ainda não pode ser obrigatório, ou solicitar no formulário de depósito o número ORCID do autor e orientador bem como o CPF do orientador e email como obrigatório, pois a plataforma Lattes não mais deixa disponível estas informações. Período de embargo: 11/07/2018 a 13/02/2020 2018-07-31T18:34:05Z 2017-12-06 Tese SILVA, João Rafael Valentim. Avaliação dos efeitos da associação entre a crotamina de Crotalus durissus terrificus e fármacos clássicos no tratamento da leishmaniose cutânea experimental. 2017. 106 f. Tese (Doutorado em Biodiversidade e Biotecnologia da Amazônia Legal - BIONORTE) -Universidade Federal do Amazonas, Manaus, 2017. https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/6518 por Acesso Aberto http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ application/pdf Universidade Federal do Amazonas Instituto de Ciências Biológicas Brasil UFAM Programa de Pós-graduação em Biodiversidade e Biotecnologia da Amazônia Legal - BIONORTE
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