Expressão gênica dos fatores de virulência da Shigella de amostras clínicas em modelo experimental murino

Barros, Ana Paula Miranda; http://lattes.cnpq.br/1614778510787844

Dissertação

Expressão gênica dos fatores de virulência da Shigella de amostras clínicas em modelo experimental murino

Introdução: Uma complexa sequência de eventos é iniciada durante o processo de invasão na Shigellose. A Shigella spp é um bacilo pertencente à família das enterobactérias cuja estratégia de virulência está relacionada à invasão epitelial e escape do sistema de defesa do hospedeiro. Em modelo in vivo...

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Autor principal:	Barros, Ana Paula Miranda
Outros Autores:	http://lattes.cnpq.br/1614778510787844
Grau:	Dissertação
Idioma:	por
Publicado em:	Universidade Federal do Amazonas 2019
Assuntos:	Bactérias gram-negativas Shigella Expressão gênica CIÊNCIAS BIOLÓGICAS Expressão gênica Modelo animal Quantificação relativa Fatores de Virulência
Acesso em linha:	https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7462

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spelling	oai:https:--tede.ufam.edu.br-handle-:tede-74622019-11-05T05:03:56Z Expressão gênica dos fatores de virulência da Shigella de amostras clínicas em modelo experimental murino Barros, Ana Paula Miranda Nogueira, Patrícia Puccinelli Orlandi http://lattes.cnpq.br/1614778510787844 http://lattes.cnpq.br/1887686774621627 Matos, Najla Benevides http://lattes.cnpq.br/4963470094090382 Souza, João Vicente Braga de http://lattes.cnpq.br/7804981785557071 Bactérias gram-negativas Shigella Expressão gênica CIÊNCIAS BIOLÓGICAS Expressão gênica Modelo animal Quantificação relativa Fatores de Virulência Introdução: Uma complexa sequência de eventos é iniciada durante o processo de invasão na Shigellose. A Shigella spp é um bacilo pertencente à família das enterobactérias cuja estratégia de virulência está relacionada à invasão epitelial e escape do sistema de defesa do hospedeiro. Em modelo in vivo, uma das metodologias utilizadas é a infecção pulmonar em murino, que apresenta boa caracterização para estudo do comportamento da Shigella durante a colonização de célula epitelial. Justificativa: O conhecimento do comportamento de amostras clínicas de Shigella selvagens da região amazônica com seus diferentes perfis de virulência e o efeito destes in vivo em modelo animal murino é inédito. Objetivo: Foi realizada a avaliação dos fatores de virulência expressos durante a infecção por cepas de Shigella spp da bacterioteca da Fiocruz em modelo murino. Material e Métodos: Foram realizados ensaios de PCR em tempo real para expressão gênica de 18 fatores de virulência com sete amostras de Shigella spp oriundas de um estudo realizado com 1500 crianças nos anos de 2007 a 2009 dos Hospitais Públicos de Manaus - Amazonas. Ocorreu a infecção intranasal com as cepas selvagens de Shigella em camundongos Balb/c para avaliação in vivo. A análise estatística foi submetida no t-Teste de Student para verificar a significância com p ˂ 0,05. Resultados: O estudo mostrou que os efetores IpaA, IpaB, IpaC e IpaD foram expressos positivamente nas sete amostras clínicas de Shigella. Os genes reguladores VirF e VirB foram expressos negativamente nas amostras testadas. Conclusão: O modelo de infecção baseado na inoculação intranasal em camundongos BALB/c é praticável. O quadro clínico patogênico em Balb/c evidenciou a ocorrência do processo infeccioso. A PCR em tempo real permitiu caracterizar as estratégias de virulência de cepas de Shigella . No período de 48h de infecção houve expressão positiva nas amostras clínicas dos genes do SST3 IpaA, IpaB, IpaC e IpaD e regulador VirA, e negativa de seus reguladores VirF e VirB, sugerindo que este panorama reflete os genes de virulência expressos durante a segunda fase da infecção por Shigella , mantida pela propagação célula-a-célula, na suas fases iniciais. Introduction: A complex sequence of events is initiated during the Shigellose invasion process. Shigella spp is a bacillus belonging to the enterobacteria family whose virulence strategy is related to epithelial invasion and escape from the host defense system. At in vivo model, one of the methodologies used is murine pulmonary infection, which presents a good characterization to study the behavior of Shigella during epithelial cell colonization. Rationale: The knowledge of the behavior of wild Shigella clinical samples from the Amazon region carring different virulence profiles and the effect of these in vivo in a murine animal model is unprecedented. Objective: The evaluation of the virulence factors expressed during infection by strains of Shigella spp from the Fiocruz bacterial library in a murine model was performed. Material and Methods: Real-time PCR for gene expression of 18 virulence factors with seven Shigella spp samples from a study enrroling 1,500 children from 2007 to 2009 of the Public Hospitals of Manaus-Amazonas was carried out. Intranasal infection in Balb/c mice with the wild strains of Shigella occurred for in vivo evaluation. Statistical analysis was performed on Student's t-test to verify significance with p ˂ 0.05. Results: The study showed that the IpaA, IpaB, IpaC and IpaD effectors were positively expressed in the seven clinical samples of Shigella . The regulatory genes VirF and VirB were negatively expressed in the samples tested. Conclusion: The infection model based on intranasal inoculation in Balb/c mice is feasible. The pathogenic clinical picture in Balb/c evidenced the occurrence of the infectious process. Real-time PCR allowed to characterize the virulence strategies of Shigella strains. In the 48-h period of infection, there was positive expression in the clinical samples of SST3 genes IpaA, IpaB, IpaC and IpaD and regulator genes VirA; and negative of their regulators VirF and VirB, suggesting that this scenario reflects the virulence genes expressed during the second phase of the Shigella infection, maintained by cell-to-cell propagation, not its early stages. CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico 2019-11-04T14:46:48Z 2016-11-17 Dissertação BARROS, Ana Paula Miranda. Expressão gênica dos fatores de virulência da Shigella de amostras clínicas em modelo experimental murino. 2016. 98 f. Dissertação (Dissertação em Biotecnologia) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus, 2016. https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7462 por Acesso Aberto application/pdf Universidade Federal do Amazonas Instituto de Ciências Biológicas Brasil UFAM Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
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