Clonagem e expressão da enzima β-glucuronidase obtida de uma biblioteca metagenômica de terra preta de índio

Batalha Junior, Minerval de Oliveira; http://lattes.cnpq.br/8115423993554638

Dissertação

Clonagem e expressão da enzima β-glucuronidase obtida de uma biblioteca metagenômica de terra preta de índio

As enzimas estão presentes em todas as células vivas, onde atuam como catalisadoras biológicas no controle metabólico de todos os organismos vivos. Os microrganismos ganham cada vez mais destaque como produtor dessas moléculas biocatalizadoras. A técnica metagenômica utilizando ferramentas molecular...

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Autor principal:	Batalha Junior, Minerval de Oliveira
Outros Autores:	http://lattes.cnpq.br/8115423993554638
Grau:	Dissertação
Idioma:	por
Publicado em:	Universidade Federal do Amazonas 2020
Assuntos:	Técnica metagenômica β-glucuronidase Enzimas hidrolases Moléculas biocatalizadoras Bioinformática CIÊNCIAS BIOLÓGICAS Enzima β-glucuronidase Metagenômica Terra Preta de Índio Expressão Heteróloga
Acesso em linha:	https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7720

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spelling	oai:https:--tede.ufam.edu.br-handle-:tede-77202020-08-26T22:13:06Z Clonagem e expressão da enzima β-glucuronidase obtida de uma biblioteca metagenômica de terra preta de índio Batalha Junior, Minerval de Oliveira Astolfi Filho, Spartaco http://lattes.cnpq.br/8115423993554638 http://lattes.cnpq.br/2699190136695057 Marçal, Lorena Nacif http://lattes.cnpq.br/2367781429843619 Cordeiro, Isabelle Bezerra http://lattes.cnpq.br/1929162702718867 Técnica metagenômica β-glucuronidase Enzimas hidrolases Moléculas biocatalizadoras Bioinformática CIÊNCIAS BIOLÓGICAS Enzima β-glucuronidase Metagenômica Terra Preta de Índio Expressão Heteróloga As enzimas estão presentes em todas as células vivas, onde atuam como catalisadoras biológicas no controle metabólico de todos os organismos vivos. Os microrganismos ganham cada vez mais destaque como produtor dessas moléculas biocatalizadoras. A técnica metagenômica utilizando ferramentas moleculares e da bioinformática torna possível descobrir novas enzimas a partir de uma amostra ambiental qualquer. A Terra Preta de Índio é encontrada em algumas regiões da Amazônia, apresentando alto teor de matéria orgânica devido à alta atividade biológica neste ambiente. A partir de uma biblioteca metagenômica de Terra Preta de Índio construída e depositada na Universidade Federal do Amazonas, foi possível identificar um grupo de enzimas hidrolases. Dentro deste grupo foi rastreada a enzima β-glucuronidase que tem papel fundamental no metabolismo bacteriano, como gene repórter em transformação de plantas, em teste antidoping e na biotransformação da molécula de glicirrizina em derivados que agrega maior valor econômico para indústria farmacêutica e cosmética. A β-glucuronidase foi clonada e expressa em E coli. BL21(DE3) pLysS utilizando como vetor o plasmídeo pET28a(+) Promega. Sua massa molecular foi estimada em 61 kDa. Sua atividade catalítica em tampão fosfato de sódio 100mM utilizando como substrato X-gal (20 mg/mL) (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopiranosídeo) foi melhor a 40 oC e pH 7. Com parâmetros cinéticos aparentes Km e Vmax 4,08 mg e 0,45 mn.min-1 respectivamente. Os resultados deste projeto irão contribuir para o melhor estudo da capacidade catalítica, comparar sua capacidade hidrolítica com outras β-glucuronidases comerciais e desta forma torná-la mais adequada para aplicação em diferentes ramos biotecnológicos. Enzymes are present in all living cells, where they act as biological catalysts in the metabolic control of all living organisms. Microorganisms are increasingly highlighted as a producer of these biocatalyst molecules. The metagenomic technique using molecular and bioinformatics tools makes it possible to discover new enzymes from any environmental sample. Black Earth the Indian is found in some regions of the Amazon, with a high content of organic matter due to the high biological activity in this environment. From a metagenomic library of Black earth the indian built and deposited at the Federal University of Amazonas, it was possible to identify a group of hydrolases enzymes. Within this group, the enzyme β-glucuronidase was screened, which plays a fundamental role in bacterial metabolism, as a reporter gene in plant transformation, in an anti-doping test and acts in the biotransformation of the glycyrrhizin molecule into derivatives that adds greater economic value to the pharmaceutical and cosmetic industry. β-glucuronidase was cloned and expressed in E coli. BL21 (DE3) pLysS using the plasmid pET28a (+) Promega as vector. Its molecular mass was estimated at 61 kDa. Its catalytic activity in 100mM sodium phosphate buffer using X-gal (20 mg / mL) (5-bromo-4-chloro-3-indolyl-β-D-galactopyranoside) as substrate was better at 40 0C and pH 7. With kinetic parameters Km and Vmax 4.08 mg and 0.45 mn.min-1 respectively. The results of this project will contribute to the better study of the catalytic capacity, to compare its hydrolytic capacity with other commercial β-glucuronidases and thus make it more suitable for application in different biotechnological branches. 2020-03-12T18:16:09Z 2019-06-28 Dissertação BATALHA JUNIOR, Minerval de Oliveira. Clonagem e Expressão da enzima β-glucuronidase obtida de uma Biblioteca Metagenômica de Terra Preta de Índio. 2019. 69 f. Dissertação (Mestrado em Biotecnologia) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus, 2019. https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/7720 por Acesso Aberto application/pdf Universidade Federal do Amazonas Instituto de Ciências Biológicas Brasil UFAM Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
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