Influência dos polimorfismos nos genes dos receptores TLR4 e TLR9 no desenvolvimento da fibrose hepática associada a infecção pelo Vírus da Hepatite C

Tarragô, Andréa Monteiro; http://lattes.cnpq.br/4644326589690231; https://orcid.org/0000-0003-3125-580X

Tese

Influência dos polimorfismos nos genes dos receptores TLR4 e TLR9 no desenvolvimento da fibrose hepática associada a infecção pelo Vírus da Hepatite C

A hepatite C é um problema de saúde pública que afeta aproximadamente 3% da população mundial. É uma doença de prognóstico muito variável que pode evoluir para a cura ou para o desenvolvimento de hepatite C crônica, cirrose hepática, carcinoma hepatocelular e morte. Vários polimorfismos nos genes re...

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Autor principal:	Tarragô, Andréa Monteiro
Outros Autores:	http://lattes.cnpq.br/4644326589690231, https://orcid.org/0000-0003-3125-580X
Grau:	Tese
Idioma:	por
Publicado em:	Universidade Federal do Amazonas 2021
Assuntos:	Antivirais de ação direta Alterações clínicas hepáticas Doença hepática crônica Resposta virológica sustentada Cirrose hepática CIÊNCIAS BIOLÓGICAS Hepatite C Fibrose hepática Polimorfismos Receptores da Imunidade Inata Hepatite C Polimorfismo Citocnas
Acesso em linha:	https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/8156

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spelling	oai:https:--tede.ufam.edu.br-handle-:tede-81562021-03-09T05:03:47Z Influência dos polimorfismos nos genes dos receptores TLR4 e TLR9 no desenvolvimento da fibrose hepática associada a infecção pelo Vírus da Hepatite C Tarragô, Andréa Monteiro Marie, Adriana Malheiro Alle http://lattes.cnpq.br/4644326589690231 http://lattes.cnpq.br/2627415957053194 Sadahiro, Aya http://lattes.cnpq.br/8658798733544812 Pontillo, Alessandra http://lattes.cnpq.br/5264956586383796 Mariuba, Luis André Morais http://lattes.cnpq.br/4784959431673419 https://orcid.org/0000-0003-3125-580X Antivirais de ação direta Alterações clínicas hepáticas Doença hepática crônica Resposta virológica sustentada Cirrose hepática CIÊNCIAS BIOLÓGICAS Hepatite C Fibrose hepática Polimorfismos Receptores da Imunidade Inata Hepatite C Polimorfismo Citocnas A hepatite C é um problema de saúde pública que afeta aproximadamente 3% da população mundial. É uma doença de prognóstico muito variável que pode evoluir para a cura ou para o desenvolvimento de hepatite C crônica, cirrose hepática, carcinoma hepatocelular e morte. Vários polimorfismos nos genes receptores tipo Toll estão associados a alterações clínicas hepaticas e distúrbios estão relacionados à inflamação. Neste estudo investigou-se a influência dos polimorfismos nos genes dos receptores TLR4 e TLR9 e sua associação sobre o perfil de citocinas em pacientes com doença hepática crônica. Os SNPs de TLR4 e TLR9 foram genotipados por PCR-RFLP em 151 pacientes com doença hepática crônica causada pelo HCV oriundos da Fundação de Medicina Tropical Doutor Heitor Vieira Dourado e 206 doadores de sangue da Fundação Hospitalar de Hematologia e Hemoterapia do Amazonas. Destes, 45 indivíduos foram selecionados de forma randomica para o ensaio de cultura, sendo 15 amostras foram provenientes de doadores saudáveis e 30 de pacientes com doença hepática crônica (15 ≤ F2 e 15 ≥ F2), tratados com DAAs e resposta virológica sustentada (RVS) confirmada pela ausência de RNA viral por testes moleculares quantitativos. A dosagem de citocinas IL-6, TNF, IL-10, IL-2, IFN-γ, IL-4 e IL17A foram realizadas pela técnica de Citometria de Fluxo, utilizando o Kit CBA (Cytometric Bead Array). Dentre os resultados obtidos relatamos a presença do genótipo 4,oriundo de um paciente do estado do Pará, descrito pela primeira vez no estado do Amazonas.Nenhum dos polimorfismos de TLR4 e TLR9 analisados neste estudo apresentou associação significativa com doença hepática crônica. As variantes TLR4 A299G A/A + A/G e TLR4 T399I C/C + C/T são mais frequentemente na população estudada. Observamos também que a combinação das variantes TLR9 -1237T/T e TLR9 -1486C/T foi maior nos grupos estudados em comparação com outras combinações de genótipos.Em seguida,estudamos a influência dos genótipos em combinação para as variantes TLR9 TLR9 -1237T/T e -1486C/T sobre perfil de citocinas séricas e em sobrenadante de cultura estimulada com LPS. Assim, observamos que pacientes portadores dos genótipos combinados de TLR9 -1237T/T e -1486C/T demonstraram aumento significativo de IL-6 (p = 0,005) e IL-4 (p = 0,0007) no soro em comparação com inivíduos saudáveis.Um aumento significativo de IL-10 foi observado em pacientes com HCV ≥ F2 (p = 0,028) em comparação com ≤ F2, enquanto as citocinas IL-6, TNF, IL-2, IFN-γ, IL-4 e IL17A não foram significativas quando comparadas entre pacientes com diferentes estágios de doença hepática. Não foi observada diferença significativa em IL-6, TNF, IL-10, IL-2, IFN-γ e IL-4 em cultura de PBMC estimulada com LPS. Apenas a IL-17A apresentou aumento significativo nos pacientes ≥ F2 (p = 0,043) em comparação com ≤ F2. Ao final pudemos observar a mudança do perfil de citocinas para TH17 sob o estímulo de LPS especialmente entre os pacientes com doença hepática crônica avançada ainda que tenham atingido resposta virológica sustentada. Concluímos que os polimorfismos associados ao risco de desenvolver câncer podem ajudar a selecionar melhor os pacientes para o tratamento do HCV. Hepatitis C is a public health problem that affects approximately 3% of the world's population. It is a very variable prognosis disease that can progress to cure or to the development of chronic hepatitis C, liver cirrhosis, hepatocellular carcinoma and death. Several polymorphisms in the Toll receptor genes are associated with clinical hepatic changes and disorders are related to inflammation. In this study we investigated the influence of polymorphisms on the TLR4 and TLR9 receptor genes and their association on the cytokine profile in patients with chronic liver disease. TLR4 and TLR9 SNPs were genotyped by PCR-RFLP in 151 patients with chronic liver disease caused by HCV from the Tropical Medicine Foundation Doctor Heitor Vieira Dourado and 206 blood donors from the Hospital Hematology and Hemotherapy Foundation of Amazonas. Of these, 45 subjects were randomly selected for the culture assay, 15 of which were from healthy donors and 30 from patients with chronic liver disease (15 ≤ F2 and 15 ≥ F2), treated with DAAs and sustained virological response ) confirmed by the absence of viral RNA by quantitative molecular tests. The cytokines IL-6, TNF, IL-10, IL-2, IFN-γ, IL-4 and IL17A were performed using the Flow Cytometry technique using the Ctom Kit (Cytometric Bead Array). Among the results obtained, we report the presence of genotype 4, from a patient from the state of Pará, described for the first time in the state of Amazonas. None of the TLR4 and TLR9 polymorphisms analyzed in this study were significantly associated with chronic liver disease. The TLR4 A299G A / A + A / G and TLR4 T399I C / C + C / T variants are more frequently found in the study population. We also observed that the combination of the TLR9 -1237T / T and TLR9 -1486C / T variants was higher in the studied groups compared to other genotype combinations. Next, we studied the influence of the genotypes in combination for TLR9 TLR9 -1237T / T variants and -1486C / T on serum cytokine profile and in LPS-stimulated culture supernatant. Thus, we observed that patients with the combined TLR9 -1237T / T and -1486C / T genotypes showed a significant increase in serum IL-6 (p = 0.005) and IL-4 (p = 0.0007) compared to healthy subjects A significant increase in IL-10 was observed in patients with HCV ≥ F2 (p = 0.028) compared to ≤ F2, whereas the cytokines IL-6, TNF, IL-2, IFN-γ, IL-4 and IL17A did not were significant when compared among patients with different stages of liver disease. No significant difference was observed in IL-6, TNF, IL-10, IL-2, IFN-γ and IL-4 in LPS-stimulated PBMC culture. Only IL-17A presented a significant increase in patients ≥ F2 (p = 0.043) compared to ≤ F2. At the end, we could observe a change in the cytokine profile for TH17 under the LPS stimulus, especially among patients with advanced chronic liver disease, even if they had sustained virological response. We conclude that the polymorphisms associated with the risk of developing cancer may help to better select patients for the treatment of HCV. CAPES 2021-03-08T19:17:29Z 2018-12-10 Tese TARRAGÔ, Andréa Monteiro. Influência dos poIimorfismos nos genes dos receptores TLR4 e TLR9 no desenvolvimento da fibrose hepática associada a infecção pelo Vírus da Hepatite C. 2018. 146 f. Tese (Doutorado em Imunologia Básica e Aplicada) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus, 2018. https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/8156 por Acesso Aberto application/pdf Universidade Federal do Amazonas Instituto de Ciências Biológicas Brasil UFAM Programa de Pós-graduação em Imunologia Básica e Aplicada
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description	A hepatite C é um problema de saúde pública que afeta aproximadamente 3% da população mundial. É uma doença de prognóstico muito variável que pode evoluir para a cura ou para o desenvolvimento de hepatite C crônica, cirrose hepática, carcinoma hepatocelular e morte. Vários polimorfismos nos genes receptores tipo Toll estão associados a alterações clínicas hepaticas e distúrbios estão relacionados à inflamação. Neste estudo investigou-se a influência dos polimorfismos nos genes dos receptores TLR4 e TLR9 e sua associação sobre o perfil de citocinas em pacientes com doença hepática crônica. Os SNPs de TLR4 e TLR9 foram genotipados por PCR-RFLP em 151 pacientes com doença hepática crônica causada pelo HCV oriundos da Fundação de Medicina Tropical Doutor Heitor Vieira Dourado e 206 doadores de sangue da Fundação Hospitalar de Hematologia e Hemoterapia do Amazonas. Destes, 45 indivíduos foram selecionados de forma randomica para o ensaio de cultura, sendo 15 amostras foram provenientes de doadores saudáveis e 30 de pacientes com doença hepática crônica (15 ≤ F2 e 15 ≥ F2), tratados com DAAs e resposta virológica sustentada (RVS) confirmada pela ausência de RNA viral por testes moleculares quantitativos. A dosagem de citocinas IL-6, TNF, IL-10, IL-2, IFN-γ, IL-4 e IL17A foram realizadas pela técnica de Citometria de Fluxo, utilizando o Kit CBA (Cytometric Bead Array). Dentre os resultados obtidos relatamos a presença do genótipo 4,oriundo de um paciente do estado do Pará, descrito pela primeira vez no estado do Amazonas.Nenhum dos polimorfismos de TLR4 e TLR9 analisados neste estudo apresentou associação significativa com doença hepática crônica. As variantes TLR4 A299G A/A + A/G e TLR4 T399I C/C + C/T são mais frequentemente na população estudada. Observamos também que a combinação das variantes TLR9 -1237T/T e TLR9 -1486C/T foi maior nos grupos estudados em comparação com outras combinações de genótipos.Em seguida,estudamos a influência dos genótipos em combinação para as variantes TLR9 TLR9 -1237T/T e -1486C/T sobre perfil de citocinas séricas e em sobrenadante de cultura estimulada com LPS. Assim, observamos que pacientes portadores dos genótipos combinados de TLR9 -1237T/T e -1486C/T demonstraram aumento significativo de IL-6 (p = 0,005) e IL-4 (p = 0,0007) no soro em comparação com inivíduos saudáveis.Um aumento significativo de IL-10 foi observado em pacientes com HCV ≥ F2 (p = 0,028) em comparação com ≤ F2, enquanto as citocinas IL-6, TNF, IL-2, IFN-γ, IL-4 e IL17A não foram significativas quando comparadas entre pacientes com diferentes estágios de doença hepática. Não foi observada diferença significativa em IL-6, TNF, IL-10, IL-2, IFN-γ e IL-4 em cultura de PBMC estimulada com LPS. Apenas a IL-17A apresentou aumento significativo nos pacientes ≥ F2 (p = 0,043) em comparação com ≤ F2. Ao final pudemos observar a mudança do perfil de citocinas para TH17 sob o estímulo de LPS especialmente entre os pacientes com doença hepática crônica avançada ainda que tenham atingido resposta virológica sustentada. Concluímos que os polimorfismos associados ao risco de desenvolver câncer podem ajudar a selecionar melhor os pacientes para o tratamento do HCV.
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