Desenvolvimento de imunossensor eletroquímico para detecção de sars-cov-2
O SARS-CoV-2 pertencente à família dos coronavírus, consiste em um vírus de RNA de segmento positivo, vírus estes que apresentam em sua estrutura espículas que lhes renderam o nome “corona”. O SARS-CoV-2 é a terceira espécie dos betacoronavírus a ocasionar surtos nas últimas décadas, e o primei...
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oai:https:--tede.ufam.edu.br-handle-:tede-88122022-04-19T05:03:26Z Desenvolvimento de imunossensor eletroquímico para detecção de sars-cov-2 Ruzo, Camila Macena Brito, Walter Ricardo http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K8238628D3&tokenCaptchar=03AGdBq27iT4Lww54vShzSA5nA0Gnsk5oYk3VwaC9emMUvnZmj9eIdVo6pWw04ekGVPeYgapLSoDvdxMGsh47f4xVKQCYg-NnqY7AW8g_u-AjctIrmK5eyezgMp4mUnmhwdwlETtUhbrEF9b6odpgrGwKykZdgAtbgItmIBQ4gRMdqf9aL0tqOPMfJLHVbk0OGSr2t6uCwsN3GuqTiCagLst7KxoKxOpPYpR0eVsyKqsskyTmAm2DL7rY0WHZHIlnKc7_0oY7AwmPS6JTWxvHDq1VfZ8YJhcGuqTSwg27xp_ZLy2UQ2l2xsaIEuea4XQjEYB2sixjzGOjCOyDu-GwvVZy53ZVRzS1GYleIH5pZ7eXudefdZg530_LXYuw1YjaLcrw6oW9_8uHkM74yBpSLg1pXyX0LVsrPczpt9JcnzixvGFGoqkbmxNaJBooG0-CSkSGGCgfj5ZEFcWDi5LGIfVVQ5Z1InAhE5M40jZ3PPGoQiFENgZn5-m71DrycH5UELLMR7I0i-14YlzD-yMphUDP0bK8k7NaHNA http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4525825H1&tokenCaptchar=03AGdBq27mXPWbtJgWOAGYt-VRvcqpEGpLWcsIHT9R1UVsjT_sHbdHCGqNqLUZ_vNl-9hv4c3t0dcxXAVLOCyy0323-uCLQcj81XQPWyydNCz9A1cLIKMITNc-y_osHu98ZXUKX6MpxlZy4w8euF-vWeYXJOY_808TH6PiXFoRSp_symjPNz25V7EFK5iPfsV_CQKudtyPUoyJNu_PjFCapRzSK6K9m375CBHyx8aUEAvqVahR-ktz6xofLHPrNOEA-IUAaxkG1Eo8mf6nhK-tHLRN-ddHO9t6fwyLa67Z0qujbYeX1cf1WTIOFQ3LLa51Zm_iweh2hWcP1R9aAuDhYvjg3rSEd_uoIf2tFR7S0t-a_h-4K1RK5pPjixSTskPHQi2Rtkz5DXHD18-uyGa8D1_XSF6p1fN1_iL0HB09tn62nVKvtvGWNt5n9-WGb8yPjrBmsCnr6hVsBYyey0taLVS5kZZxgFcJMPoo0cR4EM2nI1YAa9yLsEO0P5kJmqlzn9amWQgrn_CZ1VawOuzicLleD2r15l3C_Q Segala, Karen http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4760669T6&tokenCaptchar=03AGdBq24e7WuUFSnKO08Id3-GiPpcVfOBdLkUTxRjFsKIldz2MSDS6AJ_WYGjzaEBYvv5WpvM0tugwNflHhQA46oAQDWoGhtiJee90bSQ4RD1LkCtwgQv43ouXK-FDXSWokQ19yqvchMuNZPoaEKjVgVzhJb8o_-LDqPixlOTIJH6nUFoviXyRsUD1GYUByvt9-c0PI5IO4k0YNnUT7UsVe4NfF3z5em6QXSCW0nZGrnDsAWlrBiUeWmx4J2cE-UnuzxBtcLAV4w47ZyMAjTXywsJcyMCR4Rsxnb4-ThyX0XU_pisNG6IkSEVuu17BykW4sy2TT9hT-oiLRi3O1BKZWRiC_8w7PwjQvB0vCENQxQk2l0WzkdZ3i64_rjRvmXuCNvg6napBFbq7-yNCgkDPANUPNyGbT_AWUNpiPkBQzJTaZmo6pbEVB2mJd3sOv5ZzicaNXAcS8yb43FnIVMHZzjn4qeNEeEUyIqgivJ3yXitfGRVREWOAvAGA8qgQ-g0mzaT79GddFcr4IWjj0cCU4UXfARKgk7pRA Paula, Marcos Marques da Silva http://buscatextual.cnpq.br/buscatextual/visualizacv.do?id=K4721646E5&tokenCaptchar=03AGdBq26GXvugtcRr7fibeXCayWf5ttw6_azl3VZ0bBPYFGymi4L_tkRievrMKS2uZPSk_D4olfVL_aYZRQKPB8s8jDhYEsiz5Ni54MR88KsUw52gxJgo-TL4vNSsDxxmsxsFNInE2p0ifbll5d6P4Gbq5HAYEhbZ8t3EJ-lQQuz8ZpTOIcTa83QnnvWj_INnfxTEnFko6jnpn8kaMH17qoBQpQ9BpW_o2FoZntj1VvTnDWdCz7yyJnwFLngf_n6cSWlTJdMz_dXmhiIJI_pzYhGmCgfkEqWh_B1huZ1Me_iNG1el_qkCOM-hjx2vGLVIBbhc273SgUPPb2-Ff1CuiMb5bZevFBzKqAkMNnVuKpoOBNDMksekyb21Hvtck12_-VbaEQutvuUuMyQ1afll3tywkIV20mQfjlcIozZ4B-EXCtIZJ68ItzUI85fZXQ4GtmkKA44pWD219DRZm_53GzOXsuMXAQTkTQ Infecções por Coronavirus Antígenos CIENCIAS EXATAS E DA TERRA Imunossensor eletroquímico SARS-CoV-2 Proteína-N Anticorpo O SARS-CoV-2 pertencente à família dos coronavírus, consiste em um vírus de RNA de segmento positivo, vírus estes que apresentam em sua estrutura espículas que lhes renderam o nome “corona”. O SARS-CoV-2 é a terceira espécie dos betacoronavírus a ocasionar surtos nas últimas décadas, e o primeiro destes a provocar um alto número de infectados e óbitos decorrentes aos efeitos da doença ao redor do mundo, recebendo status de pandemia. O coronavírus apresenta um alto grau de transmissibilidade, sendo necessárias medidas que sejam capazes de frear a propagação. Os testes atuais para COVID-19 consistem em testes moleculares e testes sorológicos, os quais apresentam desvantagens pelo alto custo e demora. Neste trabalho é proposto a fabricação de um imunossensor eletroquímico para detecção de anticorpos de SARS-CoV-2. A imobilização do antígeno (proteína-N) foi realizada em substrato de carbono modificado com grafeno carboxilado (GC). As etapas de construção foram caracterizadas por meio de técnicas eletroquímicas (voltametria cíclica (VC) e espectroscopia de impedância eletroquímica (EIE)), análise termogravimétrico (TGA), ATR-FTIR e DRX. A detecção analítica foi executada por meio indireto através da técnica de cronoamperometria, com o uso de anticorpo marcado com a enzima HRP (IgG-HRP), e TMB na presença de peroxido de hidrogênio (H2O2) como substrato eletroquímico. Empregou-se amostras de soro humano para os respectivos ensaios. Para o substrato de carbono, três camadas de GC mostrou-se suficiente para a otimização dos parâmetros eletroquímicos e posterior imobilização do antígeno, a etapa de imobilização da proteína N foi confirmada por meio de mudanças na resposta eletroquímica do imunossensor, foi constatado o melhor tempo para sua imobilização como sendo o tempo de 30 minutos. Na resposta cronoamperométrica foi registrada uma variação nos valores de corrente catódica para amostras com diagnósticos de IgG-positivos quando comparados às amostras de negativas, corroborando com os resultados disponibilizados por meio da técnica de ELISA. SARS-CoV-2, belonging to the coronavirus family, consists of a positive-segment RNA virus, viruses that have spicules in their structure that have given them the name “corona”. SARS-CoV-2 is the third species of betacoronavirus to cause outbreaks in recent decades, and the first of these to cause a high number of infections and deaths resulting from the effects of the disease around the world, receiving pandemic status. The coronavirus has a high degree of transmissibility, requiring measures that are able to stop the spread. Current tests for COVID-19 consist of molecular tests and serological tests, which have disadvantages due to their high cost and delay. In this work, the fabrication of electrochemical immunosensor for the detection of SARS-CoV-2 antibodies is proposed. Immobilization of the antigen (N-protein) was performed on a carbon substrate modified with carboxylated graphene (CG). The construction steps were characterized by electrochemical techniques (cyclic voltammetry (CV) and electrochemical impedance spectroscopy (EIS), thermogravimetric analysis (TGA), , ATR-FTIR and XRD. Analytical detection was performed indirectly through the chronoamperometry technique, using antibody labeled with the enzyme HRP (IgG-HRP), and TMB in the presence of hydrogen peroxide (H2O2) as electrochemical substrate. Human serum samples were used for the respective assays. For the carbon substrate, three layers of CG proved to be sufficient for the optimization of electrochemical parameters and subsequent immobilization of the antigen, the immobilization step of the N protein was confirmed through changes in the electrochemical response of the immunosensor, the best time for its immobilization as 30 minutes. In the chronoamperometric response, a variation in anodic current values was recorded for samples with IgG-positive diagnoses when compared to negative samples, corroborating the results available through the ELISA technique CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior 2022-04-18T18:51:09Z 2022-02-18 Dissertação RUZO, Camila Macena. Desenvolvimento de imunossensor eletroquímico para detecção de sars-cov-2. 2022. 73 f. Dissertação (Mestrado em Química) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus (AM), 2022. https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/8812 por Acesso Aberto application/pdf Universidade Federal do Amazonas Instituto de Ciências Exatas Brasil UFAM Programa de Pós-graduação em Química |
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O SARS-CoV-2 pertencente à família dos coronavírus, consiste em um vírus de
RNA de segmento positivo, vírus estes que apresentam em sua estrutura espículas que
lhes renderam o nome “corona”. O SARS-CoV-2 é a terceira espécie dos betacoronavírus
a ocasionar surtos nas últimas décadas, e o primeiro destes a provocar um alto número de
infectados e óbitos decorrentes aos efeitos da doença ao redor do mundo, recebendo status
de pandemia. O coronavírus apresenta um alto grau de transmissibilidade, sendo
necessárias medidas que sejam capazes de frear a propagação. Os testes atuais para
COVID-19 consistem em testes moleculares e testes sorológicos, os quais apresentam
desvantagens pelo alto custo e demora. Neste trabalho é proposto a fabricação de um
imunossensor eletroquímico para detecção de anticorpos de SARS-CoV-2. A
imobilização do antígeno (proteína-N) foi realizada em substrato de carbono modificado
com grafeno carboxilado (GC). As etapas de construção foram caracterizadas por meio
de técnicas eletroquímicas (voltametria cíclica (VC) e espectroscopia de impedância
eletroquímica (EIE)), análise termogravimétrico (TGA), ATR-FTIR e DRX. A detecção
analítica foi executada por meio indireto através da técnica de cronoamperometria, com
o uso de anticorpo marcado com a enzima HRP (IgG-HRP), e TMB na presença de
peroxido de hidrogênio (H2O2) como substrato eletroquímico. Empregou-se amostras de
soro humano para os respectivos ensaios. Para o substrato de carbono, três camadas de
GC mostrou-se suficiente para a otimização dos parâmetros eletroquímicos e posterior
imobilização do antígeno, a etapa de imobilização da proteína N foi confirmada por meio
de mudanças na resposta eletroquímica do imunossensor, foi constatado o melhor tempo
para sua imobilização como sendo o tempo de 30 minutos. Na resposta
cronoamperométrica foi registrada uma variação nos valores de corrente catódica para
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