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Tese
Análise do processo da penetração à colonização de Fusarium decemcellulare em guaranazeiro e obtenção de mutantes para genes relacionados à patogenicidade por meio de CRISPR/Cas9
Diante da necessidade de entender os mecanismos de interação entre Fusarium decemcellulare e o guaranazeiro, bem como analisar genes que possam ter papel importante na patogenicidade e/ou na virulência, este trabalho teve como objetivo analisar o processo de interação patógeno-hospedeiro, por...
Autor principal: | Fernandes, Joelma dos Santos |
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Outros Autores: | http://lattes.cnpq.br/8884118027809527 |
Grau: | Tese |
Idioma: | por |
Publicado em: |
Universidade Federal do Amazonas
2023
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Assuntos: | |
Acesso em linha: |
https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/9577 |
Resumo: |
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Diante da necessidade de entender os mecanismos de interação entre Fusarium
decemcellulare e o guaranazeiro, bem como analisar genes que possam ter papel importante na
patogenicidade e/ou na virulência, este trabalho teve como objetivo analisar o processo de
interação patógeno-hospedeiro, por meio: 1- do estabelecimento de condições eficientes para
transformação genética de F. decemcellulare (Fdc) e a obtenção de linhagens transformantes
expressando as proteínas GFP (Green fluorescent protein) e RFP (Red fluorescent protein) para
aplicação na análise da penetração e colonização; 2- da identificação da forma de colonização do
Fdc em guaranazeiro para auxiliar no estabelecimento de métodos de controle da doença; e 3- da
obtenção de linhagens de Fdc com knockout para genes relacionados à produção de auxina pelo
patógeno. Nos resultados evidenciamos que, o método de transformação genética mediado por
Agrobacterium tumefaciens (ATMT) não possibilitou a obtenção de transformantes de Fdc,
enquanto a transformação via polietileno glicol (PEG) apresentou eficiência média de três
transformantes por µg de DNA expressando as proteínas fluorescentes GFP ou RFP. Estes
transformantes foram então utilizados nos estudos sobre a colonização do patógeno na planta,
analisada por meio de microscopia confocal e de varredura. As análises mostraram que o Fdc
apresenta colonização do tipo sistêmica, tanto em tomateiro quanto em guaranazeiro, sendo
isolado a montante e a jusante do ponto de inoculação com 30 a 120 dias em ambas as plantas,
porém necessita de ferimentos para ter sucesso no processo de penetração. Apresenta ainda,
alta associação aos tricomas intactos e rompidos em guaranazeiro, não sendo observada
preferência por invasão, como por exemplo, através de aberturas naturais (estômatos). Neste
trabalho, além dos relatos sobre complexo superbrotamento estamos relatando pela primeira
vez em guaranazeiro sintomas que se assemelham aos da doença de Dieback causada pelo F.
decemcellulare. O método de transformação aqui estabelecido também foi útil como primeiro
passo para etapa do processo de edição do genoma por meio do sistema CRISPR/Cas9 em Fdc,
o qual foi avaliado quanto à obtenção de knockout único ou triplo. Foram obtidos 23
tranformantes, destes nenhum apresentou duplo ou triplo knockout, e para deleção de um único
gene foram obtidos oito transformantes, sendo três com knockout para o gene aldh localizado
no cromosso 9, quatro knockout para o gene aldh no cromosso 2 e um para o gene yucca. |