Transformação genética para a integração de dois cassetes de expressão no genoma da levedura Pichia pastoris.
A Pichia pastoris foi considerada uma das melhores leveduras para expressão devido a sua característica metilotrófica, pois permitem rígido controle da expressão pela simples manipulação do meio de cultura e indução por metanol. As proteínas a serem expressas serão a glicoamilase e alfa-amilase, sim...
| Autor principal: | João Victor de Melo Verçosa |
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| Grau: | Relatório de Pesquisa |
| Idioma: | pt_BR |
| Publicado em: |
Universidade Federal do Amazonas
2016
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| Assuntos: | |
| Acesso em linha: |
http://riu.ufam.edu.br/handle/prefix/3727 |
| Resumo: |
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A Pichia pastoris foi considerada uma das melhores leveduras para expressão devido a sua característica metilotrófica, pois permitem rígido controle da expressão pela simples manipulação do meio de cultura e indução por metanol. As proteínas a serem expressas serão a glicoamilase e alfa-amilase, simultaneamente, em cassetes de expressão integrados na P. pastoris. Essas enzimas estão no grupo das amilases, que compõem cerca de 30% das enzimas de uso industrial no mundo, sendo amplamente utilizadas para fermentação alcoólica de etanol. Três estratégias de transformação serão testadas, nos quais, primeiramente será integrado o gene da glicoamilase no locus aox1 e a alfa-amilase no locus his4, e o inverso, além da transformação da levedura hospedeira simultaneamente com os cassetes de expressão das duas proteínas direcionando para a integração em loci diferentes. Os clones recombinantes a serem expressos em meio líquido serão selecionados meio sólido. Após a indução, os extratos serão avaliados por meio de gel SDS-PAGE e em ensaios bioquímicos para características sacarificante e dextrinizante. |