Relatório de Pesquisa

Transformação genética para a integração de dois cassetes de expressão no genoma da levedura Pichia pastoris.

A Pichia pastoris foi considerada uma das melhores leveduras para expressão devido a sua característica metilotrófica, pois permitem rígido controle da expressão pela simples manipulação do meio de cultura e indução por metanol. As proteínas a serem expressas serão a glicoamilase e alfa-amilase, sim...

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Autor principal: João Victor de Melo Verçosa
Grau: Relatório de Pesquisa
Idioma: pt_BR
Publicado em: Universidade Federal do Amazonas 2016
Assuntos:
Transformação
Integração
Amilases
CIÊNCIAS BIOLÓGICAS: BIOQUÍMICA
Acesso em linha: http://riu.ufam.edu.br/handle/prefix/3727
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spelling oai:localhost:prefix-37272021-11-26T14:31:16Z Transformação genética para a integração de dois cassetes de expressão no genoma da levedura Pichia pastoris. João Victor de Melo Verçosa Spartaco Astolfi Filho Transformação Integração Amilases CIÊNCIAS BIOLÓGICAS: BIOQUÍMICA A Pichia pastoris foi considerada uma das melhores leveduras para expressão devido a sua característica metilotrófica, pois permitem rígido controle da expressão pela simples manipulação do meio de cultura e indução por metanol. As proteínas a serem expressas serão a glicoamilase e alfa-amilase, simultaneamente, em cassetes de expressão integrados na P. pastoris. Essas enzimas estão no grupo das amilases, que compõem cerca de 30% das enzimas de uso industrial no mundo, sendo amplamente utilizadas para fermentação alcoólica de etanol. Três estratégias de transformação serão testadas, nos quais, primeiramente será integrado o gene da glicoamilase no locus aox1 e a alfa-amilase no locus his4, e o inverso, além da transformação da levedura hospedeira simultaneamente com os cassetes de expressão das duas proteínas direcionando para a integração em loci diferentes. Os clones recombinantes a serem expressos em meio líquido serão selecionados meio sólido. Após a indução, os extratos serão avaliados por meio de gel SDS-PAGE e em ensaios bioquímicos para características sacarificante e dextrinizante. CNPQ 2016-09-23T15:39:08Z 2016-09-23T15:39:08Z 2014-07-31 Relatório de Pesquisa http://riu.ufam.edu.br/handle/prefix/3727 pt_BR Acesso Restrito PDF Universidade Federal do Amazonas Brasil Biologia Instituto de Ciências Biológicas PROGRAMA PIBIC 2013 UFAM
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