Dissertação

Avalia??o da express?o dos genes STING, cGAS e interferon do tipo I (? e ?) em culturas prim?rias de c?lulas do sistema nervoso central de camundongos, infectadas com o v?rus Zika

O V?rus Zika (ZIKV) ? um arbov?rus de RNA fita simples polaridade positiva, que compreende um ?nica Open Reading Frame (ORF), utilizada para originar todas as prote?nas virais. Os receptores de reconhecimento de padr?o (PRRs) participam no processo de identifica??o de estruturas compartilhadas e con...

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Autor principal: Souza, Mayque Paulo Miranda de
Grau: Dissertação
Idioma: por
Publicado em: Instituto Evandro Chagas 2020
Assuntos:
Sistema Nervoso Central / virologia
Infec??o por Zika virus
Express?o G?nica / gen?tica
Cultura Prim?ria de C?lulas
Interferon-alfa / gen?tica
Acesso em linha: http://patua.iec.gov.br//handle/iec/4210
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spelling ir-iec-42102020-12-16T11:53:50Z Avalia??o da express?o dos genes STING, cGAS e interferon do tipo I (? e ?) em culturas prim?rias de c?lulas do sistema nervoso central de camundongos, infectadas com o v?rus Zika Souza, Mayque Paulo Miranda de Cruz, Ana Cec?lia Ribeiro Diniz J?nior, Jos? Ant?nio Pican?o Holanda, Gustavo Moraes Quaresma, Juarez Ant?nio Sim?es Sistema Nervoso Central / virologia Infec??o por Zika virus Express?o G?nica / gen?tica Cultura Prim?ria de C?lulas Interferon-alfa / gen?tica O V?rus Zika (ZIKV) ? um arbov?rus de RNA fita simples polaridade positiva, que compreende um ?nica Open Reading Frame (ORF), utilizada para originar todas as prote?nas virais. Os receptores de reconhecimento de padr?o (PRRs) participam no processo de identifica??o de estruturas compartilhadas e conservadas de pat?genos invasores. Dentre os PRRs, a via cGAS/STING ? conhecida pela capacidade de detectar DNA citos?lico, al?m de estar envolvida em infec??es por alguns v?rus de RNA, como o ZIKV, que dependendo do hospedeiro, pode se utilizar de diversos mecanismos para tentar contornar a resposta imune. O objetivo deste trabalho foi avaliar a express?o de genes envolvidos na via cGAS/STING, correlacionando com a cin?tica do ZIKV em culturas prim?rias de micr?glias e neur?nios de camundongos imunocompetentes. A susceptibilidade e permissividade das c?lulas foi confirmada mediante o ensaio de imunofluoresc?ncia indireta (IFI). Titula??o em placa do sobrenadante de micr?glias e neur?nios foi realizado, e posteriormente, realizou-se extra??o, quantifica??o e normaliza??o do RNA total para determinar a cin?tica viral por RT-qPCR com sonda TaqMan, para a express?o dos genes alvos, foi realizada RT-qPCR com SYBR Green. Por fim, a clivagem da prote?na STING murina foi avaliada pelo ensaio de Western Blotting. O perfil de titula??o em placa do sobrenadante determinado para micr?glias e neur?nios foi semelhante, com maiores t?tulos de unidades formadoras de placas (PFUs) em 1, 2, 3 e 4 dpi, respectivamente, para ambos os tipos celulares. A cin?tica do ZIKV foi semelhante em ambas c?lulas, com os maiores t?tulos virais encontrados no 2, 3, 1 e 4 dpi, respectivamente, enquanto que, o perfil de express?o dos genes cGAS, STING, INF-? e INF-?, foi bastante diferente nestes tipos celulares, incluindo supress?o de alguns deles, como observado no caso do gene cGAS de neur?nios, para todos os dias p?s infec??o investigados. N?o foi constatada a clivagem da prote?na STING de camundongos nas an?lises do perfil proteico. Em conclus?o, a cin?tica do ZIKV foi semelhante em micr?glias e neur?nios de camundongos, por?m, o perfil de express?o dos genes avaliados foi variado, o que indica que mesmo c?lulas de um mesmo hospedeiro e tecido, podem se comportar de maneira particular quando infectadas por este v?rus. Sendo assim, a fim de obter uma melhor compreens?o da din?mica rela??o v?rus-hospedeiro, mais estudos utilizando diferentes tipos celulares de um mesmo hospedeiro, bem como, comparando diferentes esp?cies, s?o necess?rios para ampliar o conhecimento acerca da patog?nese do ZIKV, contribuindo assim, na orienta??o para o desenvolvimento de medicamentos e vacinas contra esse agente patog?nico. 2020-12-16T11:33:46Z 2020-12-16T11:33:46Z 2020 Disserta??o SOUZA, Mayque Paulo Miranda de. Avalia??o da express?o dos genes STING, cGAS e interferon do tipo I (? e ?) em culturas prim?rias de c?lulas do sistema nervoso central de camundongos, infectadas com o v?rus Zika. 78 f. Disserta??o (Mestrado em Virologia) - Instituto Evandro Chagas, Programa de P?s-Gradua??o em Virologia, Ananindeua, 2020. http://patua.iec.gov.br//handle/iec/4210 por Acesso Aberto application/pdf Instituto Evandro Chagas
institution Instituto Evandro Chagas (IEC)
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