Trichoderma são fungos anamórficos pertencentes à classe dos hifomicetos, também
chamados fungos imperfeitos, assexuais ou conidiais e que têm como teleomorfo o
gênero Hypocrea. São fungos de vida livre, distribuídos em todo o mundo e encontrados
em solos de diversas temperaturas, especialmente naqueles que contém matéria
orgânica. Geralmente não são considerados importantes patógenos humanos, mas
existem alguns relatos indicando patogenicidade ocasional em algumas espécies. Sua
fácil manipulação e cultivo in vitro, estabilidade e viabilidade das colônias preservadas,
fazem desse gênero um grande alvo para as pesquisas biotecnológicas. Por tais
características, foram isolados Trichoderma das plantas Victoria amazonica, Rollinia
sp., Murraya paniculata e Strychnos cogens; da madeira Scleronema micranthum,
conhecida como cardeiro; de jatobá (Hymenaea courbaril), do solo de cultura de cubiu
(Solanum sessiliflorum) e de terra preta de índio, com o objetivo de identificar, pela
biologia molecular, em nível de espécie, tais isolados, bem como avaliar sua capacidade
de produção de enzimas celulolíticas. Das 30 linhagens obtidas foram realizadas
culturas monospóricas, as quais foram preservadas em óleo mineral, método Castellani
e em glicerol 10%. A partir da suspensão em glicerol, de cada amostra foi inoculado
10μL em 20mL de BD e cultivado a 26oC, a 100 rpm por 40:00h. Em seguida foi
extraído o DNA genômico, deste realizada a PCR específica para as regiões ITS-1 e
ITS-2 do DNA ribossômico e posteriormente o sequenciamento. Para a produção de
enzimas, os isolados foram previamente cultivados em meio indutor. Foram inoculados
10μL da solução de esporos (Glicerol 10%) em 50mL de solução de Manachini onde o
substrato indutor utilizado foi a carboximetilcelulose. Os fungos foram incubados a
27°C, 120 rpm durante 120 horas. A dosagem de CMCase foi efetuada com base no
método do Ácido Dinitrosalicílico. Para a dosagem de β-glucosidase foi utilizado o pnitrofenil-
β-D-Glucopiranosídeo (pNPG) como substrato para a enzima. A concentração
de proteínas totais foi determinada pelo método de Bradford, utilizando-se o reagente
concentrado comercial da Bio-RadTM e albumina de soro bovino (ASB), como padrão.
O resultado da identificação molecular das primeiras 13 amostras nos revelaram as
espécies: T. harzianum, T. koningii, T. asperellum, T. viride, T. ovaslisporum, T.
hamatum, T. piluliferum e T. koningiopsis, com um percentual entre 96 e 99% de
identidade e 100% de confiabilidade. Os resultados enzimáticos para CMCase
indicaram valores baixos, inferiores a 0,100 U/mL com exceção de T. koningii (MPCe
10 3.2), T. harzianum (MPCe 2 2.2a), ambos isolados de M. paniculata, e o isolado
1437 identificado como Trichoderma sp., proveniente de terra preta de índio, que
apresentaram valores um pouco mais altos de 0,112 e 0,103 e 0,105 U/mL,
respectivamente. Para β-glucosidase, os resultados apresentados mostraram alta
atividade na grande maioria dos isolados com destaque para T. harzianum MPCe 3
3.1(10,45U/mL) e T. piluliferum Vrc 2 3.2 (9,71 U/mL). Todos os isolados produziram
proteínas em meio de cultura contendo carboximetilcelulose como substrato indutor
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