Proteases e quitinases de fungos anamórficos de insetos da Amazônia com uso potencial em biocontrole
Enzimas hidrolíticas são utilizadas em diversos ramos da indústria e da biotecnologia, dentre elas, as proteases e as quitinases. Estas enzimas são secretadas por fungos que causam patologias em diversos organismos, representando um importante fator de virulência para os mesmos. O objetivo deste...
| Autor principal: | Barroncas, Jéssica Ferreira |
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| Outros Autores: | http://lattes.cnpq.br/9296495792597483 |
| Grau: | Dissertação |
| Idioma: | por |
| Publicado em: |
Universidade Federal do Amazonas
2013
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oai:https:--tede.ufam.edu.br-handle-:tede-48612018-03-24T05:03:46Z Proteases e quitinases de fungos anamórficos de insetos da Amazônia com uso potencial em biocontrole Barroncas, Jéssica Ferreira Teixeira, Maria Francisca Simas http://lattes.cnpq.br/9296495792597483 http://lattes.cnpq.br/9290942168610438 Teixeira, Maria Francisca Simas Oliveira, Ila Maria de Aguiar Costa Neto, Pedro de Queiroz Enzimas hidrolíticas Proteases Quitinases Fungos Micologia CIÊNCIAS BIOLÓGICAS: MICROBIOLOGIA Enzimas hidrolíticas são utilizadas em diversos ramos da indústria e da biotecnologia, dentre elas, as proteases e as quitinases. Estas enzimas são secretadas por fungos que causam patologias em diversos organismos, representando um importante fator de virulência para os mesmos. O objetivo deste trabalho foi isolar fungos de percevejo de renda (Vatiga illudens) e cochonilha (Orthezia sp.), avaliar o potencial proteolítico dos extratos dos isolados, determinar a temperatura e pH ótimo da enzima, bem como realizar a purificação parcial de proteases e quitinases produzidas. Para isolamento de fungos os insetos foram colocados em câmara úmida a 25 º C, seguido do cultivo em ágar Sabouraud. Os fungos foram submetidos à fermentação submersa em meio MGYP. O extrato bruto foi recuperado por filtração a vácuo e inoculado em cup-plate, em meio sólido com caseína 10% (p/v) a 37 ° C. O efeito da temperatura e do pH sobre a atividade proteolítica foi determinada usando azocaseína 1% (p/v) como substrato, em diferentes tampões de pH (5-10) e temperaturas (25 ° C-60 ° C). Cinco isolados fúngicos foram selecionados a partir dos obtidos de Vatiga illudens e de Orthezia sp. Os extratos selecionados foram submetidos à purificação parcial das proteínas por fracionamento com sulfato de amônio nas frações 0-60% e 60-80% de saturação. Após diálise, foram determinadas concentração protéica, atividade proteolítica, atividade quitinolítica, atividade específica, rendimento e fator de purificação de cada uma das frações e dos extratos brutos. De V. illudens, foram identificados os fungos: Paecilomyces sp. e P. javanicus. A maior diversidade de fungos foi encontrada em Orthezia sp., representado por Fusarium decemcellulare, Penicillium aurantiogriseum, P. brevicompactum, P. fellutanum, P. glabrum e P. solitum. Os ascomicetos foram Eupenicillium javanicum. Os isolados formaram halos de 10-19 mm de diâmetro em meio sólido e o extrato bruto expressou atividade proteolítica variando entre 1,40-27,07 U/mL. A atividade enzimática da temperatura e pH ótimo variou entre os isolados. Na fração F2 (60-80%) foram registradas as maiores atividades específicas tanto de protease quanto de quitinase. Nos extratos semipurificados de P. brevicompactum (C3) e P. fellutanum (C1) foram observadas as maiores atividades específicas de protease (18,72 U/mg) e quitinase (0,88 μg/mg), respectivamente. Hydrolytic enzymes are used in many areas of industry and biotechnology, for example of hydrolytic enzymes we can nominate the proteases and chitinases. These enzymes are secreted by fungi that cause diseases in other organisms, and they represente an important virulence factor for them. The aim of this work was to isolate fungi from lace bug (Vatiga illudens) and mealybug (Orthezia sp.), evaluating the proteolytic potential of the extracts originated from isolates, and to determine the optimal temperature and pH of the enzyme, as well as to perform partial purification of proteases and chitinases produced by the fungi. For fungi isolation, insects were placed in a moist chamber at 25 °C, followed by the inoculum in Petri dishes containing Sabouraund agar. After that, the fungi were underwent to submerged cultivation with MGYP medium. The crude extract was recovered by vacuum filtration and inoculated into cup-plate, in casein solid medium 10% (w/v) at 37 °C. The effect of temperature and pH on the proteolytic activity was determined using azocasein 1% (w/v) as substrate at different pH buffers (5-10) and temperatures (25 °C-60 °C). Five fungal isolates were selected from the obtained from V. illudens and Orthezia sp. The selected extracts were subjected to partial protein purification by ammonium sulfate fractionation in fractions 0-60% and 60-80% saturation. After dialysis, protein concentration, proteolytic and chitinolytic activity, specific activity, yield and purification factor of each of the fractions and crude extracts were determined. From V. illudens the identified fungi were: Paecilomyces sp. and P. javanicus. In Orthezia sp was found the greater diversity of fungi, represented by Fusarium decemcellulare, Penicillium aurantiogriseum, P. brevicompactum, P. fellutanum, P. glabrum, P. solitum and the ascomycetes Eupenicillium javanicum. The isolates formed halos of 10-19 mm diameter in solid medium and the crude extract expressed proteolytic activity ranging from 1.40 to 27.07 U/mL. The enzymatic activity of temperature and pH optima varied among isolates. In the F2 fraction (60-80%) were recorded the highest specific activities of proteases and chitinases. The semi-purified extracts of P. brevicompactum (C3) and P. fellutanum (C1) showed the highest specific activities of protease (18.72 U / mg) and chitinase (0.88 mg / mg), respectively CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico 2013-07-18 Dissertação BARRONCAS, Jéssica Ferreira. Proteases e quitinases de fungos anamórficos de insetos da Amazônia com uso potencial em biocontrole. 2013. 64 f. Dissertação ( Mestrado em Diversidade Biológica) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus, 2013. por Acesso Aberto application/pdf Universidade Federal do Amazonas Instituto de Ciências Biológicas Brasil UFAM Programa de Pós-graduação em Diversidade Biológica |
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TEDE - Universidade Federal do Amazonas |
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Enzimas hidrolíticas são utilizadas em diversos ramos da indústria e da biotecnologia,
dentre elas, as proteases e as quitinases. Estas enzimas são secretadas por fungos que causam
patologias em diversos organismos, representando um importante fator de virulência para os
mesmos. O objetivo deste trabalho foi isolar fungos de percevejo de renda (Vatiga illudens) e
cochonilha (Orthezia sp.), avaliar o potencial proteolítico dos extratos dos isolados,
determinar a temperatura e pH ótimo da enzima, bem como realizar a purificação parcial de
proteases e quitinases produzidas. Para isolamento de fungos os insetos foram colocados em
câmara úmida a 25 º C, seguido do cultivo em ágar Sabouraud. Os fungos foram submetidos à
fermentação submersa em meio MGYP. O extrato bruto foi recuperado por filtração a vácuo e
inoculado em cup-plate, em meio sólido com caseína 10% (p/v) a 37 ° C. O efeito da
temperatura e do pH sobre a atividade proteolítica foi determinada usando azocaseína 1%
(p/v) como substrato, em diferentes tampões de pH (5-10) e temperaturas (25 ° C-60 ° C).
Cinco isolados fúngicos foram selecionados a partir dos obtidos de Vatiga illudens e de
Orthezia sp. Os extratos selecionados foram submetidos à purificação parcial das proteínas
por fracionamento com sulfato de amônio nas frações 0-60% e 60-80% de saturação. Após
diálise, foram determinadas concentração protéica, atividade proteolítica, atividade
quitinolítica, atividade específica, rendimento e fator de purificação de cada uma das frações e
dos extratos brutos. De V. illudens, foram identificados os fungos: Paecilomyces sp. e P.
javanicus. A maior diversidade de fungos foi encontrada em Orthezia sp., representado por
Fusarium decemcellulare, Penicillium aurantiogriseum, P. brevicompactum, P. fellutanum,
P. glabrum e P. solitum. Os ascomicetos foram Eupenicillium javanicum. Os isolados
formaram halos de 10-19 mm de diâmetro em meio sólido e o extrato bruto expressou
atividade proteolítica variando entre 1,40-27,07 U/mL. A atividade enzimática da temperatura
e pH ótimo variou entre os isolados. Na fração F2 (60-80%) foram registradas as maiores
atividades específicas tanto de protease quanto de quitinase. Nos extratos semipurificados de
P. brevicompactum (C3) e P. fellutanum (C1) foram observadas as maiores atividades
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