Proteases são enzimas comercialmente importantes e dentre as fontes desses biocatalizadores
estão os basidiomicetos. A utilização destas nos diferentes segmentos industriais é o fator
essencial que contribui para busca de proteases com novas propriedades. O objetivo deste
trabalho foi investigar a atividade proteolítica de quatro espécies de cogumelos da Coleção de
Cultura DPUA para avaliar mecanismos regulatórios da espécie produtora de altos níveis de
protease para aplicação industrial. Auricularia mixotricha DPUA 1695, Ganoderma lucidum
DPUA 1694, Lentinus citrinus DPUA 1693 e Pleurotus ostreatoroseus DPUA 1720 foram
investigados quanto à produção de proteases em meio GYP [(glicose 2% (p/v) + peptona 1%
(p/v) + extrato de levedura 0,5% (p/v)]. Na determinação da influência de diferentes
parâmetros na síntese enzimática, fontes de carbono, nitrogênio, tamanho do inóculo, tempo
de cultivo e volume do meio foram estudados. Para verificação da influência de substrato
indutor (gelatina e extrato de levedura), idade do inóculo e pH inicial foi realizado um
planejamento fatorial completo 24, com 4 pontos centrais. Na determinação do pH ótimo,
soluções tampão 0,1 M foram utilizadas: citrato (pH 4-6), fosfato ( pH 6-8) e carbonatobicarbonato
de sódio (pH 9-10). O efeito da temperatura na atividade proteolítica foi avaliado
nas temperaturas 30, 40, 50, 60, 70 e 80 °C. O efeito de íons metálicos e inibidores foi
determinado utilizando CaCl2, KCl, NaCl, CuSO4, FeSO4, MgSO4 e ZnSO4, EDTA, PMSF,
pepstatina e ácido iodoacético. A eficiência da protease na remoção de manchas foi realizada
utilizando tecidos de algodão manchados com polpa de açaí, suco de couve e suco V8
vegetais®. No teste de compatibilidade do extrato bruto com detergentes comerciais foi
utilizado Ace®, Ariel®, Minuano® e Omo®. P. ostreatoroseus DPUA 1720 apresentou
maior quantitativo enzimático, sendo a espécie selecionada para determinação da influência
de diferentes parâmetros na síntese enzimática. A maior produção de protease foi verificada
utilizando 5 discos miceliais como inóculo em 40 mL do meio AYG [amido 2% (p/v) +
extrato de levedura 0,5% (p/v) + gelatina 1% (p/v)], durante sete dias. No planejamento
fatorial a máxima atividade obtida foi verificada no ensaio contendo amido 2% (p/v) +
gelatina 0,5% (p/v) + extrato de levedura 1% (p/v), pH 8 e inóculo com 16 dias de cultivo. As
proteases apresentaram atividade máxima em pH 7,0 a 50 oC, sendo estáveis por 1h entre pH
7 a 9 e de 30 a 50 oC. Íons Fe2+ estimularam a atividade, enquanto ions K+, EDTA, PMSF e
ácido iodoacético inibiram, indicando ser metalo, serino e cisteino-proteases. O extrato bruto
foi eficaz na remoção de mancha de açaí e apresentou compatiblidade com Minuano®. As
características destas enzimas como pH e temperatura ótima, compatibilidade e estabilidade,
permitem sua utilização como aditivos na indústria de detergentes
|
