A fosfatase alcalina tem como função catalisar a hidrólise de um fosfomonoéster, e
assim, possui a propriedade de remover grupos de fosfatos 5’ de DNA e RNA, o que
faz dela uma importante ferramenta para engenharia genética. A expressão do gene da
fosfatase alcalina de E. coli foi obtida clonando-se o gene no plasmídeo pBR322.
Posteriormente o gene estrutural phoA foi transferido para o vetor pAC92, derivado do
pUC18, onde sua expressão ficou parcialmente regulada, originando o plasmídeo
recombinante capaz de programar em E. coli maior nível de expressão. Porém este
vetor possui a necessidade do controle da expressão com glicose no meio, do
contrário, o excesso da enzima no periplasma causa a morte celular das hospedeiras.
Em trabalhos desenvolvidos no Laboratório de Tecnologias de DNA da UFAM um vetor
denominado pULA foi construído a partir da obtenção da região promotora do pAC92,
com operador restaurado, clonado em um vetor denominado de pUN, este sendo o
pUC18 modificado sem o gene de β–galactosidase e sem sua região
promotora/operadora de origem. O presente trabalho descreve a expressão da
fosfatase alcalina de E. coli por meio do sistema de expressão regulável do pULA,
assim como a purificação desta enzima. Dessa forma, o gene phoA foi subclonado no
vetor pULA com sucesso, dando origem ao vetor pUNF, que se apresentou estável e
funcional, regulado pela indução do IPTG. A melhor expressão da enzima no sistema
em questão, ocorreu em meio com concentração de 0,05% de glicose, com um 1mM
de IPTG e após 18 horas de indução.
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