Neste trabalho foi construído um conjunto de vetores de expressão regulados para finalidades
de clonagem e expressão de genes heterólogos em Escherichia coli. Os promotores são
elementos essenciais dos cassetes de expressão utilizados nesse tipo vetores. Os vetores,
derivados desse trabalho, que expressam genes heterólogos em diferentes níveis e de forma
bem regulada foram baseados em um promotor sintético denominado de DM. A atividade do
promotor DM pode ser modulada tanto por IPTG como por glicose. Os plasmídeos
denominados: pDM02 (baixa cópia), pCDM (baixa cópia), pDMU01 (alta cópia) e pDMU02
(alta cópia) foram capazes de expressar em altos níveis e de maneira regulada em E. coli as
sequências gênicas da GFP (Green Fluorescent Protein), da tiorredoxina humana fusionada
com a enteroquinase bovina e do hormônio de crescimento de tambaqui. A sequência
promotora DM foi modificada por meio de síntese química randômica de DNA para a
construção de uma biblioteca de novos promotores sintéticos e estes foram a seguir ligados ao
vetor pCDM em posição adequada para expressar o gene repórter da GFP. Clones de E. coli
contendo plasmídeos recombinantes com diferentes promotores foram obtidos. Um grupo de
clones que possuem novas sequências promotoras mantiveram a regulação por glicose e
tiveram maiores níveis de expressão enquanto outro grupo de clones apresentou menor nível
de regulação por glicose, porém com níveis bem maiores de expressão de GFP. Os resultados
mostram que os novos promotores sintéticos podem ser utilizados para o desenvolvimento de
novos, potentes e regulados vetores de expressão para a expressão de genes heterólogos tanto
para fins de pesquisa como para bioindustriais.
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