Desenvolvimento de novos vetores bem  regulados para Escherichia coli

Moreira, Diego da Silva; http://lattes.cnpq.br/4491316744815814

Tese

Desenvolvimento de novos vetores bem regulados para Escherichia coli

Neste trabalho foi construído um conjunto de vetores de expressão regulados para finalidades de clonagem e expressão de genes heterólogos em Escherichia coli. Os promotores são elementos essenciais dos cassetes de expressão utilizados nesse tipo vetores. Os vetores, derivados desse trabalho, que...

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Autor principal:	Moreira, Diego da Silva
Outros Autores:	http://lattes.cnpq.br/4491316744815814
Grau:	Tese
Idioma:	por
Publicado em:	Universidade Federal do Amazonas 2023
Assuntos:	Tambaqui (Peixe) - Crescimento Hormônios - Regulação Peixes - Crescimento CIENCIAS BIOLOGICAS Promotor sintético regulado Vetores de expressão Regulação do operon lac Hormônio de crescimento de tambaqui
Acesso em linha:	https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/9519

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spelling	oai:https:--tede.ufam.edu.br-handle-:tede-95192024-09-28T05:05:59Z Desenvolvimento de novos vetores bem regulados para Escherichia coli Moreira, Diego da Silva Astolfi Filho, Spartaco http://lattes.cnpq.br/4491316744815814 http://lattes.cnpq.br/2699190136695057 Carvalho, Elen Bethleen de Souza Mariuba, Luis Andre Morais Procópio, Rudi Emerson de Lima Tambaqui (Peixe) - Crescimento Hormônios - Regulação Peixes - Crescimento CIENCIAS BIOLOGICAS Promotor sintético regulado Vetores de expressão Regulação do operon lac Hormônio de crescimento de tambaqui Neste trabalho foi construído um conjunto de vetores de expressão regulados para finalidades de clonagem e expressão de genes heterólogos em Escherichia coli. Os promotores são elementos essenciais dos cassetes de expressão utilizados nesse tipo vetores. Os vetores, derivados desse trabalho, que expressam genes heterólogos em diferentes níveis e de forma bem regulada foram baseados em um promotor sintético denominado de DM. A atividade do promotor DM pode ser modulada tanto por IPTG como por glicose. Os plasmídeos denominados: pDM02 (baixa cópia), pCDM (baixa cópia), pDMU01 (alta cópia) e pDMU02 (alta cópia) foram capazes de expressar em altos níveis e de maneira regulada em E. coli as sequências gênicas da GFP (Green Fluorescent Protein), da tiorredoxina humana fusionada com a enteroquinase bovina e do hormônio de crescimento de tambaqui. A sequência promotora DM foi modificada por meio de síntese química randômica de DNA para a construção de uma biblioteca de novos promotores sintéticos e estes foram a seguir ligados ao vetor pCDM em posição adequada para expressar o gene repórter da GFP. Clones de E. coli contendo plasmídeos recombinantes com diferentes promotores foram obtidos. Um grupo de clones que possuem novas sequências promotoras mantiveram a regulação por glicose e tiveram maiores níveis de expressão enquanto outro grupo de clones apresentou menor nível de regulação por glicose, porém com níveis bem maiores de expressão de GFP. Os resultados mostram que os novos promotores sintéticos podem ser utilizados para o desenvolvimento de novos, potentes e regulados vetores de expressão para a expressão de genes heterólogos tanto para fins de pesquisa como para bioindustriais. In this work, a set of regulated expression vectors was constructed for purposes of cloning and expression of heterologous genes in Escherichia coli. Promoters are essential elements of the expression cassettes used in this type of vectors. The vectors, derived from this work, which express heterologous genes at different levels and in a well-regulated way were based on a synthetic promoter called DM. DM promoter activity can be modulated by both IPTG and glucose. The plasmids named: pDM02 (low copy), pCDM (low copy), pDMU01 (high copy) and pDMU02 (high copy) were capable of expressing at high levels and in a regulated manner in E. coli the gene sequences of GFP (Green Fluorescent Protein), human thioredoxin fused with bovine enterokinase and tambaqui growth hormone. The DM promoter sequence was modified by means of random chemical DNA synthesis to construct a library of new synthetic promoters and these were then ligated into the pCDM vector in an appropriate position to express the GFP reporter gene. E. coli clones containing recombinant plasmids with different promoters were obtained. A group of clones that had new promoter sequences maintained glucose regulation and had higher levels of expression, while another group of clones showed a lower level of glucose regulation, but with much higher levels of GFP expression. The results show that the new synthetic promoters can be used for the development of new, potent and regulated expression vectors for the expression of heterologous genes for both research and bioindustrial purposes. CAPES - Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior 12/06/2023 - 27/09/2024 2023-07-28T14:59:26Z 2023-02-24 Tese MOREIRA, Diego da Silva. Desenvolvimento de novos vetores bem regulados para Escherichia coli. 2023. 203 f.Tese (Doutorado em Biotecnologia) - Universidade Federal do Amazonas, Manaus (AM), 2023. https://tede.ufam.edu.br/handle/tede/9519 por Acesso Aberto http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/ application/pdf Universidade Federal do Amazonas Instituto de Ciências Biológicas Brasil UFAM Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia
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Desenvolvimento de novos vetores bem regulados para Escherichia coli

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