Os modelos de cultura celular tridimensional in vitro estão cada vez mais conhecidos e aplicáveis nos laboratórios de pesquisa, devido a sua capacidade de mimetizar as estruturas semelhantes dos tecidos, em comparação aos modelos de cultura celular bidimensional em monocamada. Na investigação do câncer tem se tornado modelos úteis para investigar o microambiente tumoral, estágios do câncer e na pesquisa de novos alvos terapêuticos. Nesse sentido, este estudo visa contribuir com a validação de um modelo in vitro de carcinoma in situ para o estudo do microambiente tumoral e avaliar sua aplicabilidade para pesquisas de novas terapias anticâncer. Foram desenvolvidos dois modelos com linhagem celular de Carcinoma de Células Escamosas (CCE): CCE-Skin, e CCEInsitu-Skin, sendo este último desenvolvido com esferoides tumorais acrescidos na pele experimental. Estudos da morfologia foram utilizados para avaliar a estrutura e presença das células nos modelos. Para os estudos de aplicabilidade, a 22-hidroxitingenona (22-HTG) foi selecionada quanto aos aspectos relacionados a citotoxicidade e invasão celular. Os resultados apontam que o modelo HaCat-Skin é um modelo em potencial para estudos de irritação e permeação em modelo de pele reconstruída in vitro. Os esferoides de carcinoma de células escamosas foram desenvolvidos com melhor morfologia após 10 dias de cultivo utilizando os micromoldes. A 22-hidroxitingenona apresentou citotoxicidade nos modelos sem célula tumoral e com células tumorais, e os modelos permitiram a determinação da atividade proteolítica de metaloproteinases de matriz após os sete dias de cultivo, bem como, no método de zimografia in situ. Os resultados obtidos são relevantes para o avanço da pesquisa na área da cultura celular tridimensional e podem contribuir para o desenvolvimento de novas metodologias para estudo do câncer e novas abordagens terapêuticas.
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